[发明专利]通过高剪切溶解来分离蜘蛛丝蛋白的方法

权利要求书

1.一种从宿主细胞分离重组蜘蛛丝蛋白的方法，其包括：

a.提供包含重组蜘蛛丝蛋白的不溶性团块；

b.将所述不溶性团块添加到包含溶剂的水性溶液中；

c.向包含所述不溶性团块的所述水性溶液施加剪切力，从而使所述重组蜘蛛丝蛋白溶解在所述水性溶液中。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述剪切力是通过微流体化施加的。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述微流体化产生约6×10⁶s^-1至10×10⁶s^-1的剪切速率。

4.如权利要求2所述的方法，其中所述微流体化产生至少约6×10⁶s^-1的剪切速率。

5.如权利要求2所述的方法，其中所述微流体化产生至少约10×10⁶s^-1的剪切速率。

6.如权利要求2-5所述的方法，其中所述微流体化在20,000psi至30,000psi下进行。

7.如权利要求6所述的方法，其中所述微流体化在30,000psi下进行。

8.如权利要求6所述的方法，其中所述微流体化在23,000psi下进行。

9.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中微流体化器是M-110P或LM10微流体化器。

10.如权利要求9所述的方法，其中所述微流体化器包括G10Z相互作用室。

11.如权利要求9所述的方法，其中所述微流体化器包括F12Y相互作用室。

12.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述剪切力施加至少两次。

13.如权利要求12所述的方法，其中所述剪切力施加至少三次。

14.如权利要求12所述的方法，其中所述剪切力在至少两次施加中是相同的。

15.如权利要求12所述的方法，其中所述剪切力在至少两次施加中是不同的。

16.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述不溶性团块来源于包含宿主细胞的细胞培养物，其中所述宿主细胞表达所述重组蜘蛛丝蛋白。

17.如权利要求16所述的方法，其还包括收集来源于所述细胞培养物的所述不溶性团块，其中所述不溶性团块包含所述重组蜘蛛丝蛋白。

18.如权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述溶剂是离散剂。

19.如权利要求18所述的方法，其中所述离散剂是尿素、硫氰酸胍(GdnSCN)或氯化胍(GdnHCL)。

20.如权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述不溶性团块以约5％、10％、15％、20％、25％或30％不溶性团块/溶剂体积添加到所述水性溶液中。

21.如权利要求19或20所述的方法，其中所述离散剂以0.1-10M的浓度存在于所述水性溶液中。

22.如权利要求19或20所述的方法，其中所述水性溶液包含约10M尿素、约4M-8MGdnHCl或约3M-6M GdnSCN。