[发明专利]猪圆环病毒2型VLP疫苗

说明书

本发明提供一种能用作畜产领域中使用的疫苗，且对物理化学负荷具有高分子稳定性的PCV2的VLP。本发明的融合蛋白具有猪圆环病毒2型的衣壳蛋白和免疫球蛋白结合域。

技术领域

本发明涉及一种融合蛋白、含该融合蛋白的病毒样颗粒(VLP：virus-likeparticles)以及含该VLP的疫苗。本发明还涉及一种上述融合蛋白的制造方法。

背景技术

由于猪圆环病毒2型(PCV2：porcine circovirus 2)感染猪时，会诱发免疫缺陷并提高对其他传染病的易感性，因此PCV2传染病对策对养猪户很重要。被PCV2感染的猪会出现猪圆环病毒相关疾病(PCVAD：porcine circovirus associated diseases)病症，作为其主要症状的断奶后多系统消耗综合征(PMWS：postweaning multisystemic wastingsyndrome)好发于5～6周龄的猪，临床特征为消瘦、皮肤苍白、发育不全、呼吸困难、腹泻和黄疸(非专利文献2)。作为该致病病毒的PCV2首次从加拿大西部出现PMWS病症的猪中被分离出来(非专利文献3)。

PCV2是一种在基因组中具有单链环状DNA且直径约20nm的无包膜病毒。PCV2具有三个开放阅读框(ORFs(open reading frames)：ORF1、ORF2、ORF3)，ORF2编码衣壳蛋白(Cap(capsid protein))。已知Cap通过将该单体60个缔合而形成作为正二十面体的多聚体分子的病毒样颗粒(非专利文献1)。由于VLP不含病毒基因组DNA因此不能够增殖，能够应用于用于预防感染PCV2的疫苗。

作为用于预防感染PCV2的疫苗，PCV2灭活疫苗“Circovac(注册商标)”、PCV1/PCV2嵌合病毒灭活疫苗“subakisin(注册商标)PCV2”已上市。另外，除了这些灭活疫苗以外，在基因重组杆状病毒/昆虫细胞表达系统中产生Cap的VLP疫苗“PORCILIS(注册商标)PCV”(非专利文献4)和“Ingelvac CircoFLEX(注册商标)”(专利文献1)等已实用化。

此外，尝试作为表达系统，使用毕赤酵母(Pichia pastoris)、芽殖酵母(Saccharomyces cerevisiae)和大肠杆菌(Escherichia coli)等，来产生PCV2的Cap(非专利文献1、5～13)。

此外，在非专利文献16中，报告了与免疫球蛋白结合域(IBD：immunoglobulin-binding domain)融合的抗原，被高效转运至淋巴滤泡，并提高该抗原的免疫原性。

另外，在非专利文献17中，作为IBD，记载有Z域。Z域是来自黄色葡萄球菌的蛋白A的IBD，具有被称作3-螺旋束(three-helix bundle)的将3根α-螺旋折叠成束(bundled)的蛋白质三维结构。需要说明的是，蛋白A是黄色葡萄球菌的病原因子之一，是存在于菌体外膜上的42kDa的蛋白质。另外，蛋白A具有一级序列相似性高的5个IBDs(E、D、A、B和C域)。需要说明的是，Z域是在B域中的两处导入氨基酸取代而制作的人工序列。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本公开专利公报“日本特表2008-526212号公报”。

非专利文献

非专利文献1：Khayat R.et al.,J.Virol.2011,85,7856-7862。

非专利文献2：Harding J.C.S.et al.,Swine Health Prod.1997,5,201-203。

非专利文献3：Ellis J.et al.,Can.Vet.J.1998,39,44-51。