[发明专利]用于使用重组繁殖缺陷性指示噬菌体检测微生物的装置和方法

权利要求书

1.一种重组噬菌体，所述重组噬菌体包含在所述噬菌体的基因组的晚期基因区中的指示基因，其中所述重组噬菌体是繁殖缺陷性的，并且其中所述重组噬菌体能够特异性地感染感兴趣微生物。

2.根据权利要求1所述的重组噬菌体，其中所述噬菌体由于病毒粒子组装所需要的晚期基因的改变或缺失而成为繁殖缺陷性的。

3.根据权利要求1所述的重组噬菌体，其中所述指示基因被插入到所述重组噬菌体的晚期基因的序列中，使得所述晚期基因无功能并且所述重组噬菌体成为繁殖缺陷性的。

4.根据权利要求1所述的重组噬菌体，其中所述指示基因代替所述重组噬菌体的晚期基因的序列的至少一部分，使得所述重组噬菌体成为繁殖缺陷性的，其中所述晚期基因是病毒粒子组装所需要的。

5.根据权利要求1所述的重组噬菌体，其中所述重组噬菌体来源于对大肠杆菌(E.coli)、或沙门氏菌属(Salmonella)、或李斯特氏菌属(Listeria)或葡萄球菌属(Staphylococcus)特异的噬菌体。

6.根据权利要求1所述的重组噬菌体，其中所述晚期基因是病毒粒子组装所需要的。

7.一种包含至少两种重组噬菌体的组合物，所述两种重组噬菌体各自包含在所述噬菌体的基因组的晚期基因区中的指示基因，其中所述重组噬菌体是繁殖缺陷性的，并且其中所述重组噬菌体能够特异性地感染一种或多种感兴趣微生物。

8.根据权利要求7所述的组合物，其中所述至少两种重组噬菌体中的每一种包含不同的指示基因。

9.根据权利要求8所述的组合物，其中所述至少两种重组噬菌体中的每一种能够特异性地感染不同的感兴趣微生物。

10.根据权利要求8所述的组合物，其中所述至少两种重组噬菌体能够感染多种感兴趣微生物。

11.根据权利要求7所述的组合物，其中所述感兴趣微生物包括大肠杆菌、沙门氏菌属、李斯特氏菌属和葡萄球菌属中的至少一种。

12.根据权利要求10所述的组合物，其中所述多种感兴趣微生物包括至少两种不同类别的细菌。

13.根据权利要求12所述的组合物，其中所述至少两种不同类别的细菌包括至少两种不同属的细菌、至少两种不同种的细菌、至少两种不同菌株的细菌或至少两种不同血清型的细菌中的一种或多种。

14.一种制备重组噬菌体的方法，包括：

选择特异性地感染靶微生物的亲代噬菌体；

改变所述亲代噬菌体的基因以产生重组的繁殖缺陷性的噬菌体；

用同源重组(HR)质粒转化靶微生物的工程化菌株，所述工程化菌株能够表达所述繁殖缺陷性的噬菌体中突变的基因的产物，所述同源重组(HR)质粒包含指示基因和在所述指示基因侧翼并与所述亲代噬菌体中的期望序列同源的HR序列；

用所述亲代噬菌体或所述繁殖缺陷性的亲代噬菌体感染所述转化的靶微生物，使得能够在所述HR质粒和所述亲代噬菌体或所述重组的繁殖缺陷性的噬菌体的基因组之间发生HR；以及

分离重组噬菌体的特定克隆，所述特定克隆是繁殖缺陷性的且能够表达所述指示基因的产物。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述改变所述亲代噬菌体的基因以产生所述繁殖缺陷性的噬菌体通过所述HR质粒和所述亲代噬菌体的基因组之间发生的HR实现，其中所述亲代噬菌体的基因通过用所述指示基因替代所述亲代噬菌体的至少一部分而改变。

16.根据权利要求14所述的方法，进一步包括生成所述靶微生物的工程化菌株。