[发明专利]开发用于发现治疗性抗体的高效杂交瘤平台

说明书

本技术总体上涉及用于产生抗体、抗体文库、杂交瘤、杂交瘤文库等的改进方法。例如，这些方法增加产生的抗原特异性B细胞的数量，增加杂交瘤的数量，和/或增加可在给定的产生周期中制造的单克隆抗体的数量。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2019年8月30日提交的美国临时专利申请号62/894,660的优先权，其内容全文据此出于所有目的以引用方式并入本文。

背景技术

数十年来，单克隆抗体一直被用作临床诊断中的关键试剂，并且它们正在成为重要的新一类治疗剂。杂交瘤技术为用于获得单克隆抗体最常用的方法。单克隆抗体是从杂交瘤细胞分泌的，是通过将产生正常抗体的脾脏B细胞与永生骨髓瘤细胞或其他永生细胞融合而产生的。

自数十年前出现以来，杂交瘤产生技术几乎没有变化(Nature 256:495–497(1975))。用于生成杂交瘤的典型方案涉及：(i)用抗原对动物(例如小鼠、大鼠或兔)进行免疫；(ii)收获产生抗体的B细胞，其通常来自脾脏；(iii)将B细胞与非分泌性骨髓瘤细胞系融合以形成杂交瘤；(iv)在选择培养基中培养杂交瘤细胞；(v)筛选产生所需抗体的细胞；以及(vi)克隆所需的杂交瘤以获得分泌抗体的同质细胞系。

需要生成更多数量的抗原特异性抗体并且改善单克隆抗体和抗体文库的产生。

发明内容

本技术一般涉及用于产生抗体、抗体文库、杂交瘤、杂交瘤文库等的改进方法，以及来自各种方法步骤的组合物。例如，这些方法可增加产生的抗原特异性B细胞的数量，增加杂交瘤的数量，和/或增加可在给定的产生周期中制造的单克隆抗体的数量。本文所述的方法可用于显著增加抗体、抗体文库、杂交瘤、杂交瘤文库等以及来自各种方法步骤的组合物的产生，以用于治疗多种疾病。例如，本文所述的方法可应用于抗体和/或杂交瘤生成，以用于治疗癌症、免疫疾病、炎性疾病和任何其他可通过抗体疗法治疗的疾病。本文所述的方法可应用于针对挑战性靶标的抗体和/或杂交瘤生成。挑战性靶标为难以生成针对该靶标的抗体的抗原，例如因为可靶向区域的大小很小，蛋白质构象很重要，和/或抗原(例如，通过翻译后修饰，诸如糖基化、磷酸化，乙酰化和甲基化)被修饰。在实施例中，靶抗原为多通道跨膜蛋白。在实施例中，多通道跨膜蛋白为G蛋白偶联受体(GPCR)。在实施例中，多通道跨膜蛋白为离子泵、离子通道或转运蛋白。

在一方面，提供了一种用于产生抗体、抗体文库、杂交瘤或杂交瘤文库的方法。在实施例中，该方法可包括以下项中的一项或多项：

(a)对多只动物注射抗原；

(b)从每只动物收获B细胞；

(c)在B细胞与融合配偶体之间形成杂交瘤；以及

(d)筛选杂交瘤对抗原的结合特异性。

在实施例中，可应用以下条件中的至少一个条件并且优选地两个条件或更多条件：

(i)该动物为远交动物；

(ii)在多个部位处对动物进行注射；

(iii)以两次注射之间不少于每周、不少于每10天、不少于每两周的频率，或持续时间更长的其他频率对动物进行注射；

(iv)对动物进行注射6周至15周；

(v)使用多种佐剂，使得对每只动物注射单一佐剂，并且对至少一些动物注射不同的佐剂；

(vi)在步骤(c)之前富集B细胞；和/或

(vii)使用经改造以表达表面和分泌的IgG两者的融合配偶体。

在一方面，提供了一种用于产生抗体、抗体文库、杂交瘤或杂交瘤文库的方法。在实施例中，该方法可包括以下项中的一项或多项：

(a)对一只或多只动物注射抗原；