[发明专利]胰岛和β-细胞类器官的功能性血管化的方法

权利要求书

1.一种用于血管化胰岛的方法，所述方法包括：

将包含β细胞的胰岛与包含编码ETV2转录因子的外源性核酸的内皮细胞共培养，其中所述ETV2转录因子在所述内皮细胞中表达，从而产生血管化的胰岛。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述内皮细胞进一步包含编码Sox16转录因子的外源性核酸，并且其中所述Sox16在所述内皮细胞中表达。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述共培养执行至少3-4周。

4.根据权利要求3所述的方法，其进一步包括将所述胰岛和所述内皮细胞共培养额外的一段时间，其中在所述内皮细胞不表达所述ETV2转录因子的条件下进行所述进一步的培养。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述进一步的共培养执行至少一周。

6.根据权利要求1到5中任一项所述的方法，其中所述内皮细胞包括人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、脂肪源性内皮细胞或器官特异性内皮细胞。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述器官特异性内皮细胞选自由以下组成的组：心脏特异性内皮细胞、肌肉特异性内皮细胞、肾脏特异性内皮细胞、睾丸特异性内皮细胞、卵巢特异性内皮细胞、淋巴特异性内皮细胞、肝脏特异性内皮细胞、胰腺特异性内皮细胞、脑特异性内皮细胞、肺特异性内皮细胞、骨髓特异性内皮细胞、脾脏特异性内皮细胞、大肠特异性内皮细胞和小肠特异性内皮细胞。

8.根据权利要求1到7中任一项所述的方法，其中所述共培养包括在包含碱性FGF(FGF-2)和肝素的培养基中培养。

9.根据权利要求1到8中任一项所述的方法，其中所述共培养在生物反应器或微流控装置中执行。

10.根据权利要求1到9中任一项所述的方法，其中所述共培养在细胞外基质上进行，所述细胞外基质包含最终组合后浓度为10mg/ml到12mg/ml的层粘连蛋白和巢蛋白的混合物以及0.2mg/ml到0.5mg/ml的胶原IV。

11.根据权利要求1到10中任一项所述的方法，其中所述血管化包括形成动脉、静脉、毛细血管、小动脉、小静脉、淋巴管或其组合。

12.一种血管化的胰岛，其通过根据权利要求1到11中任一项所述的方法来获得。

13.一种方法，其包括将根据权利要求12获得的所述血管化的胰岛施用于有需要的受试者。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述胰岛对于所述受试者而言是自体的。

15.根据权利要求13或14所述的方法，其中所述胰岛通过外科手术或导管植入或者通过血管内途径输注施用于所述受试者。

16.根据权利要求13或14所述的方法，其中所述胰岛被皮下地或通过血管内输注地施用于所述受试者。

17.一种用于制备血管化的β-细胞类器官的方法，所述方法包括将β-细胞与包含编码ETV2转录因子的外源性核酸的内皮细胞在所述成熟的内皮细胞表达所述ETV2转录因子的条件下共培养。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述内皮细胞进一步包含编码Sox16转录因子的外源性核酸。

19.根据权利要求17或18所述的方法，其中所述共培养包括在包含碱性FGF(FGF-2)和肝素的培养基中培养。