[发明专利]稳定化的含细胞体液样品的多模式分析

权利要求书

1.一种用于稳定化和富集含细胞体液中包含的多种生物靶标的方法，所述方法包括

(A)将含细胞体液与包含一种或多种以下稳定化剂的稳定化组合物接触：

(a)至少一种伯、仲或叔酰胺，

(b)至少一种聚(氧乙烯)聚合物，和/或

(c)至少一种凋亡抑制剂，

从而提供稳定化的含细胞体液样品；

(B)将所述稳定化的含细胞体液样品保持稳定化期；和

(C)处理所述稳定化的含细胞体液样品以从所述稳定化的含细胞体液中富集三种或更多种选自下组的生物靶标

-至少一个细胞亚群，

-胞外核酸，

-胞外囊泡，和

-胞内核酸。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述富集的细胞亚群包含目标稀有细胞，任选地其中所述目标稀有细胞选自下组：肿瘤细胞，特别是循环肿瘤细胞(CTC)、胎儿细胞、干细胞、被病毒或寄生虫感染的细胞、循环内皮细胞(CEC)和循环内皮祖细胞(EPC)。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中步骤(C)包括从所述稳定化的体液样品中获得至少一个含细胞部分和至少一个细胞-耗竭部分，且其中在(C)中的处理包括

由变体A

(aa)将所述稳定化的含细胞体液样品分离成至少一个含细胞部分和至少一个细胞-耗竭部分；

(bb)进一步处理所述含细胞部分，其中进一步处理所述含细胞部分包括

(i)从所述含细胞部分中富集细胞亚群，优选包含目标稀有细胞的；和/或

(ii)从所述含细胞部分富集胞内核酸(任选地，基因组DNA)；

(cc)进一步处理所述细胞-耗竭部分，其中进一步处理所述细胞-耗竭部分包括

(i)从所述细胞-耗竭部分富集胞外核酸，任选地，胞外DNA；和/或

(ii)从所述细胞-耗竭部分富集胞外囊泡；

或由变体B

(aa)从所述稳定化的含细胞体液样品中富集细胞亚群，优选包含目标稀有细胞；

(bb)将所述稳定化的含细胞体液样品分离为含细胞部分和细胞-耗竭部分，从中去除所述目标细胞亚群；

(cc)进一步处理所述细胞-耗竭部分，其中进一步处理所述细胞-耗竭部分包括

(i)从所述细胞-耗竭部分富集胞外核酸，任选地，胞外DNA；和/或

(ii)从所述细胞-耗竭部分富集胞外囊泡；和

(dd)任选地，从所述含细胞部分富集胞内核酸，优选基因组DNA；

或由变体C

(aa)将所述稳定化的含细胞体液样品分为至少两个等分并从所提供的等分中的至少一个富集细胞亚群，优选包含稀有细胞；

(bb)提供至少一个含细胞部分和至少一个细胞-耗竭部分；

(cc)进一步处理所述细胞-耗竭部分，其中进一步处理所述细胞-耗竭部分包括

(i)从所述细胞-耗竭部分富集胞外核酸，任选地，胞外DNA；和/或

(ii)从所述细胞-耗竭部分富集胞外囊泡；和

(dd)任选地，从所述含细胞部分富集胞内核酸，优选基因组DNA。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，所述方法还包括

(D)处理所述富集的三种或更多种生物靶标用于分析。