[发明专利]用于确定包含核酸如RNA和任选存在的颗粒的样品组合物的至少一个参数的方法

权利要求书

1.一种用于确定样品组合物的一个或多个参数的方法，其中所述样品组合物包含RNA和任选存在的颗粒，所述方法包括：

(a)使所述样品组合物的至少部分进行场-流分级，从而将所述样品组合物中含有的组分按其大小分级以产生一个或多个样品级分；

(b)至少测量从步骤(a)获得的一个或多个样品级分中至少一个的UV信号和任选的光散射(LS)信号；以及

(c)从所述UV信号并且任选地从所述LS信号计算所述一个或多个参数，

其中所述一个或多个参数包括RNA完整性、RNA的总量、游离RNA的量、与颗粒结合的RNA的量、含有RNA的颗粒的大小、含有RNA的颗粒的大小分布以及含有RNA的颗粒的定量大小分布。

2.权利要求1的方法，其中所述场-流分级是流场-流分级，如非对称流场-流分级(AF4)或中空纤维流场-流分级(HF5)。

3.权利要求1或2的方法，其中使用具有适合防止RNA渗透膜的截留分子量(MW)的膜进行步骤(a)，优选截留MW在2kDa-30kDa的范围内的膜，如10kDa的截留MW的膜。

4.权利要求1-3中任一项的方法，其中使用聚醚砜(PES)或再生纤维素膜进行步骤(a)。

5.权利要求1-4中任一项的方法，其中使用高达8mL/min，优选高达4mL/min，更优选高达2mL/min的交叉流速进行步骤(a)。

6.权利要求1-5中任一项的方法，其中使用以下交叉流速谱进行步骤(a)：1.0-2.0mL/min持续10min，在30min内从1.0-2.0mL/min至0.01-0.07mL/min的指数梯度；0.01-0.07mL/min持续30min；以及0mL/min持续10min。

7.权利要求1-6中任一项的方法，其中使用在0.05-0.35mL/min的范围内，优选在0.10-0.30mL/min的范围内，更优选在0.15-0.25mL/min的范围内的注入流量进行步骤(a)。

8.权利要求1-7中任一项的方法，其中使用在0.30-0.70mL/min的范围内，优选在0.40-0.60mL/min的范围内，更优选在0.45-0.55mL/min的范围内的检测器流量进行步骤(a)。

9.权利要求1-8中任一项的方法，其中使用对照RNA的完整性计算所述样品组合物中含有的RNA的完整性。

10.权利要求9的方法，其中通过以下步骤确定对照RNA的完整性：

(a')使含有对照RNA的对照组合物的至少部分进行场-流分级，特别是AF4或HF5，从而将所述对照组合物中含有的组分按其大小分级以产生一个或多个对照级分；

(b')至少测量从步骤(a')获得的一个或多个对照级分中至少一个的UV信号；

(c'1)从步骤(b')中获得的UV信号计算从一个UV峰的最大高度到所述UV峰末端的面积，从而获得A_50％(对照)；

(c'2)从步骤(b')中获得的UV信号计算步骤(c'1)中使用的一个峰的总面积，从而获得A_100％(对照)；以及

(c'3)确定A_50％(对照)和A_100％(对照)之间的比例，从而获得所述对照RNA的完整性(I(对照))。