[发明专利]干细胞用冷藏保存液

说明书

本发明提供一种适合于以非冷冻状态来冷藏保存人或动物的iPS细胞等干细胞或胚胎的冷藏保存液以及冷藏保存方法。基于一个实施方式的冷藏保存液，钠离子种的量相对于钾离子种的量的基于离子的摩尔比(Na⁺/K⁺的比)为0.5～1.3，以1～8mM的浓度含有Trolox或其类似物，以0.1～4.2mM的浓度含有腺嘌呤或其盐或衍生物，含有全部的必需氨基酸，或含有除了1种、2种或3种以外必需氨基酸的全部的必需氨基酸，必需氨基酸的总含量为50～200mg，非必需氨基酸的总含量为50～200mg/L。

技术领域

本发明涉及一种用于以非冷冻状态保存细胞、组织、类器官、脏器等的保存液。特别涉及一种用于以比室温低的温度，例如2～15℃、2～8℃或2～6℃进行保存的冷藏保存液。另外，特别是涉及一种用于使人iPS细胞等多能干细胞(pluripotent cells)以及其他干细胞(stemcells)、或由其得到的类器官等的衍生物、初期胚(初期胚胎)等悬浮或浸渍而进行保存的冷藏保存液。

背景技术

简便、高效且稳定地保存/供给iPS、ES细胞等干细胞是再生医疗的基础研究和临床应用研究或药物开发研究领域中不可或缺的重要技术。人的iPS细胞和ES细胞的冷冻保存具有以下诸多问题：若为缓慢冷冻保存法，则保存后的生存率较低，或者作为用于冷冻保存的耐冻材料的DMSO具有细胞毒性、分化诱导性等。细胞的非冷冻低温保存作为从短期(例如一天～两周)到中期(例如半个月～三个月)的保存法，是非常有魅力的技术，不仅如此，在考虑到分化诱导的细胞的保存、类器官的保存等再生医疗技术的产业化或在药物开发中的应用的情况下，其优点很大。但是，使用作为脏器的低温保存液而被广泛使用的UW液(UW_sln；BELZERUW(注册商标)COLDSTORAGE SOLUTION)，对含有人的iPS细胞的多能干细胞等进行低温保存是很困难的，需要开发新的冷藏保存技术。

在肝脏、肾脏等移植中使用的脏器的冷藏保存中，广泛了使用UW液，其成为实质上的黄金标准(最佳基准)。在20世纪80年代(1980年代)开发的UW溶液是一种由细胞内型的低Na离子和高K离子的盐类组成构成的溶液，其中包括乳糖酸(Lactobionate)、棉子糖(Raffinose)、谷胱甘肽(Glutathion)、羟乙基淀粉(Hydroxy-ethylstarch)等的相对简单的组成。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：PCT/JP2009/002941(JP5726525B)

专利文献2：JP6220108B(JP2012-217342A)

专利文献3：WO2016/076317A

非专利文献

非专利文献1：COMPARE BELZER UWTM COLD STORAGE SOLUTION TO VIASPANhttps://bridgetolife.com/compare-belzer-uw-cold-storage-solution-to-viaspan/

非专利文献2：A novel efficient feeder-free culture system for thederivation of human induced pluripotent stem cells,Scientific Reports 4:3594doi:10.1038/srep03594

非专利文献3：Cryopreservation and Hypothermal Storage of HematopoieticStem Cellshttps://etd.ohiolink.edu/！etd.send_file？accession＝ucin1439307244disposition＝inline