[发明专利]导入用于提高蛋白质生产性的单个条形码系统的信号肽超高速筛选方法

权利要求书

1.一种组合物，用于在各种信号肽中筛选将靶蛋白有效分泌到宿主细胞外的特定信号肽，其特征在于，

上述组合物包含含有信号肽标签的多肽或编码上述多肽的核酸分子，

上述信号肽标签包含由每个信号肽的条形码互不相同的3个以上的氨基酸组成的条形码序列，

上述3个以上的氨基酸选自由亮氨酸、脯氨酸、丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸及天冬氨酸组成的组中。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，上述信号肽标签还包含蛋白质水解切割位点，上述蛋白质水解切割位点位于上述条形码序列的N末端，使得条形码序列能够被蛋白质切割。

3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，上述蛋白质水解切割位点选自由胰蛋白酶切割位点、凝血酶切割位点、肠激酶切割位点、因子Xa切割位点、胶原酶切割位点及烟草蚀纹病毒蛋白酶切割位点组成的组中。

4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，上述蛋白质水解切割位点为胰蛋白酶切割位点。

5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，上述胰蛋白酶切割位点选自由赖氨酸及精氨酸组成的组中。

6.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，上述蛋白质水解切割位点通过连接肽与条形码序列相连接。

7.根据权利要求6所述的组合物，其特征在于，上述连接肽包含一个以上的甘氨酸。

8.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，包含上述信号肽标签的多肽在上述条形码序列的C末端还包含亲和标签，上述亲和标签用于在宿主细胞培养液中分离及纯化条形码序列。

9.根据权利要求8所述的组合物，其特征在于，上述亲和标签选自由His标签、myc标签、FLAG标签、SUMO标签、CYD标签、HPC标签、CBP标签及HA标签组成的组中。

10.根据权利要求9所述的组合物，其特征在于，上述亲和标签为由2个至15个组氨酸组成的His标签。

11.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，上述信号肽标签由以下式1表示：

式1：胰蛋白酶切割位点-连接肽-条形码序列-连接肽-亲和标签-胰蛋白酶切割位点。

12.根据权利要求11所述的组合物，其特征在于，上述信号肽标签由以下式2表示：

式2：赖氨酸或精氨酸-甘氨酸-条形码序列-甘氨酸-亲和标签-赖氨酸或精氨酸。

13.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，在包含上述信号肽标签的多肽中，靶蛋白结合在信号肽标签的N末端。

14.根据权利要求13所述的组合物，其特征在于，在包含上述信号肽标签的多肽中，信号肽结合在上述靶蛋白的N末端。

15.一种载体，其特征在于，包含编码多肽的核酸分子，上述多肽包含根据权利要求1至14中任一项所述的信号肽标签。

16.一种筛选方法，用于筛选通过在宿主细胞中表达靶蛋白来将上述靶蛋白分泌到宿主细胞外的特定信号肽，其特征在于，包括：

步骤1)，为各种信号肽制备根据权利要求15所述的载体来构建文库；

步骤2)，利用上述载体转化宿主细胞；

步骤3)，从转化的上述宿主细胞中表达包含信号肽标签的多肽；以及

步骤4)，对包含分泌到转化的上述宿主细胞外的信号肽标签的多肽、信号肽标签或信号肽标签所包含的条形码序列进行定量。