[发明专利]修饰的双链供体模板

权利要求书

1.一种双链DNA同源定向修复(HDR)供体，其包含第一同源臂区、插入区和第二同源臂区；其中所述第一同源臂区和所述第二同源臂区包含对5'-端处或附近的一个或多个核苷酸的修饰。

2.根据权利要求1所述的双链DNA HDR供体，其中所述修饰包括：对所述第一同源臂区的5′-端处或附近的一个或多个核苷酸的2′-位置的修饰，和对所述第二同源臂区的5′-端处或附近的一个或多个核苷酸的2′-位置的修饰。

3.根据权利要求1或2所述的双链DNA HDR供体，其中所述修饰包括对所述第一同源臂区和所述第二同源臂区的5′-端处或附近的5′-端核苷酸、5′-倒数第二个核苷酸、5′-倒数第三个(第三)核苷酸或所述核苷酸的组合的2′-位置的修饰。

4.根据权利要求1-3中的任一项所述的双链DNA HDR供体，其中所述双链DNA HDR供体的5′-端处或附近的修饰包括2′-OME、2′-F或2′-MOE中的一者或多者。

5.根据权利要求1-4中的任一项所述的双链DNA HDR供体，其中所述双链DNA HDR供体的5′-端处或附近的修饰包括2′-MOE。

6.根据权利要求1-5中的任一项所述的双链DNA HDR供体，其中所述5′-端处或附近的修饰是相对于靶DNA的非模板错配。

7.根据权利要求1-6中的任一项所述的双链DNA HDR供体，其中所述第一同源臂区和所述第二同源臂区的长度为40至150个核苷酸。

8.根据权利要求1-7中的任一项所述的双链DNA HDR供体，其中所述第一同源臂区和所述第二同源臂区的长度为至少100个核苷酸。

9.根据权利要求1-8中的任一项所述的双链DNA HDR供体，其中所述双链DNA HDR供体还包含通用引物序列。

10.根据权利要求1-9中的任一项所述的双链DNA HDR供体，其中所述插入区大于100bp。

11.根据权利要求1-10中的任一项所述的双链DNA HDR供体，其中所述插入区大于0.25kb、大于0.5kb、大于1kb、大于2kb、大于3kb、大于4kb、大于5kb、大于6kb、大于7kb、大于8kb、大于9kb或大于10kb。

12.根据权利要求1-11中的任一项所述的双链DNA HDR供体，其中所述双链HDR供体在5′-端或3′-端中的任一者处包含发夹。

13.根据权利要求1-12中的任一项所述的双链DNA HDR供体，其中所述双链HDR供体在5′-端和3′-端两者处包含发夹。

14.根据权利要求1-13中的任一项所述的双链DNA HDR供体，其中所述双链DNA HDR供体在可编程核酸酶系统中提高同源定向修复效率并减少同源不依赖性整合。

15.一种可编程核酸酶系统，其包含修饰的双链DNA同源定向修复(HDR)供体、可编程核酸酶和gRNA，其中gRNA分子能够将可编程核酸酶分子靶向到靶核酸。

16.根据权利要求15所述的可编程核酸酶系统，其中所述修饰的双链DNA HDR供体包含第一同源臂区、插入区和第二同源臂区；其中所述第一同源臂区和所述第二同源臂区包含对5'-端处或附近的一个或多个核苷酸的修饰。