[发明专利]蛋白质提取新方法

权利要求书

1.一种提取细胞质蛋白或周质蛋白的方法，该方法包括：

-提供包含细胞的第一细胞悬浮液，这些细胞含有要提取的目的细胞质蛋白或周质蛋白，该第一细胞悬浮液具有第一温度，以及

-将该第一细胞悬浮液加热至操作温度，在该操作温度下，这些细胞中的至少一部分经受热诱导的裂解，并且该要提取的目的细胞质蛋白或周质蛋白的至少一部分不经受不可逆变性，

其中该第一细胞悬浮液的加热包括：

-提供水溶液，该水溶液具有高于该第一温度的第二温度，以及

-将该第一细胞悬浮液与该水溶液混合，从而获得第二细胞悬浮液，该第二细胞悬浮液具有高于该第一温度的第三温度。

2.根据权利要求1所述的方法，其中该第一细胞悬浮液的加热还包括：

-将该第二细胞悬浮液从该第三温度加热至该操作温度。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中该第三温度比该操作温度低不超过10℃，优选不超过5℃。

4.根据权利要求1所述的方法，其中该第三温度是该操作温度。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该方法还包括：

-将该第二细胞悬浮液维持在该操作温度下，优选地维持在1s至20min的范围内或在10s至20min的范围内，优选在1s至10min的范围内或在10s至10min的范围内，更优选在1s至5min的范围内或在10s至5min的范围内，最优选在10s至4min的范围内，比如在10s至30s的范围内或在1min至4min的范围内的时间段。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该方法还包括：

-将该第二细胞悬浮液从该操作温度冷却到第四温度，该第四温度优选是经可逆变性的要提取的目的细胞质蛋白或周质蛋白的至少一部分经受复性的温度。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中该方法还包括：

-从细胞碎片和/或天然宿主细胞蛋白中分离该目的细胞质蛋白或周质蛋白。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中

-该第一温度在0℃至37℃的范围内，优选在2℃至37℃的范围内，更优选在8℃至30℃的范围内，更优选在18℃至25℃的范围内；和/或

-该操作温度低于90℃，比如在20℃至90℃的范围内，优选在40℃至90℃的范围内，更优选在50℃至90℃的范围内，更优选在60℃至90℃的范围内，更优选在70℃至90℃的范围内，更优选在70℃至85℃的范围内，最优选在75℃至85℃的范围内；和/或

-该第二温度低于110℃，比如在40℃至110℃的范围内，优选在50℃至110℃的范围内，更优选在60℃至99℃的范围内，优选在70℃至99℃的范围内，更优选在80℃至99℃的范围内，更优选在90℃至99℃的范围内，最优选在90℃至95℃的范围内；和/或

-该第三温度低于90℃，比如在40℃至90℃的范围内，优选在50℃至90℃的范围内，更优选在60℃至85℃的范围内，更优选在65℃至85℃的范围内，更优选在65℃至80℃的范围内，更优选在65℃至78℃的范围内，最优选在68℃至78℃的范围内。

9.根据权利要求6至8中任一项所述的方法，其中该第四温度在2℃至37℃的范围内，优选在8℃至30℃的范围内或在25℃至37℃的范围内，更优选在18℃至25℃的范围内。

10.根据权利要求6至9中任一项所述的方法，其中在同时高于该第一温度和该第四温度的温度下的停留时间不超过20min，比如在1s至20min的范围内或在10s至20min的范围内，优选不超过10min，比如在1s至10min的范围内或在10s至10min的范围内，更优选不超过5min，比如在1s至5min的范围内或在10s至5min的范围内。