[发明专利]一种针对副猪嗜血杆菌的新型疫苗

说明书

本发明涉及与根据SEQ ID No：1的蛋白具有至少69％的序列同一性的蛋白或该蛋白的免疫原性片段，用于通过对猪施用疫苗来针对副猪嗜血杆菌血清型4的感染和副猪嗜血杆菌血清型5的感染保护猪的预防性方法中，所述疫苗包含所述蛋白或其免疫原性片段作为抗原。本发明还涉及疫苗、制备这种疫苗的方法和针对副猪嗜血杆菌保护猪的方法。

发明的一般领域

本发明一般涉及针对病原菌副猪嗜血杆菌(Haemohilus parasuis)的感染对猪的治疗。特别地，本发明涉及用于预防性治疗猪以针对该细菌的感染的新型疫苗，其中疫苗诱导针对最普遍的副猪嗜血杆菌血清型的保护。

发明背景

副猪嗜血杆菌是影响猪的最重要的细菌之一。由该病原体引起的疾病的特征在于多发性浆膜炎，并且其被称为格拉瑟氏病(disease)。副猪嗜血杆菌存在于所有主要的养猪国家中，并且仍然是当代猪生产系统中的重要病原体。除了引起疾病之外，副猪嗜血杆菌通常从健康猪的上呼吸道分离。已知存在不同的副猪嗜血杆菌血清型，这些中的每一种都可以使用免疫扩散技术得到鉴定(Kielstein et al.in J.Clin.Microbiol.30:862-865；1992和Rapp-Gabrielson et al.in AJVR 53:659-664；1992)。通过各种类型的疫苗已经实现了导致死亡率降低的成功疫苗接种。

如今广泛使用灭活副猪嗜血杆菌(即菌苗)疫苗。所有市售的副猪嗜血杆菌疫苗都是灭活疫苗。大多数目前可获得的商业疫苗是通过繁殖毒性副猪嗜血杆菌菌株，然后将该菌株灭活而产生的。通过高速离心使细菌培养物沉淀，并再悬浮于无菌磷酸盐缓冲盐水中，随后用合适的佐剂一起配制，所述佐剂例如矿物油、氢氧化铝、卡波姆、皂苷、维生素E乙酸酯、角鲨烯、角鲨烯等。除了单价疫苗之外，还有二价、三价或四价副猪嗜血杆菌疫苗，其包括各种血清型。它们通常提供低水平的交叉保护，并且它们对同源血清型更有效。这些灭活疫苗，例如Porcilis(MSD，Boxmeer，荷兰)在控制格拉瑟氏病全世界爆发中起重要作用。

稳定减毒的副猪嗜血杆菌菌株在理论上可以用作安全有效的疫苗。然而，减毒的副猪嗜血杆菌疫苗的开发受到限制，因为缺乏关于副猪嗜血杆菌的主要毒力因子的知识，这使得难以产生可用作潜在疫苗的副猪嗜血杆菌突变体。迄今为止，还没有基因工程化的活减毒或灭活副猪嗜血杆菌疫苗候选物。

已经研究了几种亚单位疫苗，但现有数据表明一些亚单位疫苗诱导高水平的抗副猪嗜血杆菌中和抗体，并且针对副猪嗜血杆菌攻击保护猪。然而，目前还没有市售的预防和控制格拉瑟氏病的亚单位疫苗。最近(Huisheng Liu et al,in Veterinary Immunologyand Immunopathology，第180卷，2016年11月1日，第53-58页)已经证明了包含新鉴定的保护性抗原的亚单位疫苗提供针对副猪嗜血杆菌攻击的部分保护，所述保护性抗原例如重组转铁蛋白结合蛋白B(TbpB)，富含TbpB、OMP2和OMP5的外膜蛋白(OMP)制剂，转铁蛋白结合蛋白A(TbpA)，三聚体自转运蛋白(VtaA)，六种分泌蛋白(PflA，Gcp，Ndk，HsdS，RnfC和HAPS_0017)，三种甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)，OapA和HPS-0675融合蛋白，各种替代性OMP(SmpA、YgiW和Fog)，6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶，细胞致死膨胀毒素亚基A、B和C，以及神经氨酸酶或脂蛋白。

迄今为止，DNA疫苗也已经显示能够且提供针对副猪嗜血杆菌的一些部分保护。该疫苗包含编码副猪嗜血杆菌GAPDH的DNA。

然而，尽管疫苗可商购获得，但是抗微生物剂仍广泛用于治疗副猪嗜血杆菌感染，这主要是由于许多现有疫苗的功效不完全，特别是考虑到不同血清型同时存在于各种猪群中。在感染副猪嗜血杆菌的早期接受抗微生物剂的猪通常能够在全身性感染中存活。然而，减少用于生长猪的抗微生物剂的量存在许多压力。

发明目的