[发明专利]未分化细胞检测法

说明书

提供可检测分化细胞群中的未分化细胞的残存/混入的标记物基因。通过将选自LINC00678和PRDM14的至少1种基因作为未分化标记物使用，检测分化细胞群中存在的未分化细胞。也提供检测未分化细胞的方法、作为未分化标记物的使用方法、未分化细胞检测试剂盒、未分化细胞株的分选方法。

技术领域

本发明涉及未分化细胞检测法。

背景技术

检测、评价再生医疗中应用的分化细胞群中的未分化iPS细胞的残存/混入从癌变风险的观点而言极其重要。迄今为止报告了检测、评价未分化iPS细胞的残存/混入的方法是通过定量PCR(qPCR)的iPS细胞特异性基因的检测法(非专利文献1)、通过在未分化细胞的培养维持条件再培养分化细胞的方法(非专利文献2)。

在以往的技术中，再培养法由于从混入的未分化iPS细胞形成集落具有正确性高的优点，另一方面，由于至检测为止花费1周以上，应用定量PCR的方法在能够简便迅速实施方面有优势。

但是，迄今为止有报告的LIN28(非专利文献1)是表达低的器官/组织的分化细胞(视网膜色素上皮细胞)具有的，另一方面，在肝细胞等的分化细胞和从iPS细胞分化诱导的细胞中未见表达，因此，具有无法在以各种分化细胞为对象的未分化iPS细胞的残存/混入的检测中利用的问题。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：PLoS One.2014 27；9(10)：e110496.

非专利文献2：PLoS One.2012；7(5)：e37342.

发明概述

发明要解决的问题

本发明的目的是提供在以视网膜色素上皮细胞以外的分化细胞为对象的情形中也可检测未分化细胞的残存/混入的标记物基因。

用于解决问题的手段

本发明人以各种分化细胞为对象，进行可普遍检测未分化iPS细胞的残存/混入的标记物基因的鉴定。

作为对于标记物基因的必需要件，仅下列是不充分的：

1.在未分化iPS细胞中特异性地表达，

2.在未分化iPS细胞以外的其它细胞谱系中的表达极低，

除此之外，也以下列为基准：

3.必需即使在未分化iPS细胞中极高表达、但在分化细胞中极少数存在也可检测。

因此，作为满足该基准的在未分化iPS细胞中高表达、在分化的内胚层细胞中表达为0.1％以下的基因，发现了LINC00678和PRDM14。通过应用这些基因，对于器官/组织的分化细胞，可以检测直至0.025％的未分化iPS细胞的残存/混入。进一步，由于这些标记物基因在分化为中胚层、和外胚层的细胞中表达也为0.1％以下，在内胚层、中胚层、外胚层的任一分化细胞中，都考虑为可检测未分化iPS细胞的残存/混入的标记物。

本发明的主旨如下。

(1)检测未分化细胞的方法，其包括测定分化细胞群中选自LINC00678和PRDM14的至少1种基因的表达水平和/或启动子活性。

(2)(1)记载的方法，其中，未分化细胞是胚胎肿瘤细胞(EC细胞)、胚胎干细胞(ES细胞)、人工多能干细胞(iPS细胞)或胚胎生殖细胞(EG细胞)，分化细胞群是从前述未分化细胞分化的细胞的群体。

(3)(1)或(2)记载的方法，其中，分化细胞群是内胚层、中胚层或外胚层的任一种的分化细胞的群体。

(4)(3)记载的方法，其中，内胚层的分化细胞是肝内胚层细胞。