[发明专利]筛选成孔膜蛋白、膜运输蛋白与分子开关的方法

权利要求书

1.一种筛选方法，包括步骤：

a)提供一细胞与一围绕该细胞的培养基，

-其中该细胞具有一报告物质不可渗透的一细胞膜，

-其中该报告物质于该细胞之内部中之浓度与该报告物质于该围绕该细胞之培养基中之浓度的商为至少2或至多0.5；

b)侦测一取决该报导物质于该细胞中之浓度并在表达于该细胞中之一感测蛋白(sensor protein)的帮助下所产生的信号；

c)诱导一膜蛋白的表达，该膜蛋白增加该细胞膜对该报导物质的渗透性；

d)侦测该取决该报导物质于该细胞中之浓度并在表达于该细胞中之该感测蛋白的帮助下所产生的信号；

e)从在步骤b)与d)中所侦测之信号强度计算一个或更多之比较参数，其中步骤b)在步骤c)之前进行且其中步骤d)在步骤c)之后进行，

其中步骤a)至e)对具有不同氨基酸序列的至少两种膜蛋白和/或对具有不同氨基酸序列的至少两种感测蛋白进行。

2.如权利要求1之筛选方法，包括更进一步之步骤：

f)确认编码该膜蛋白之DNA序列和/或编码该感测蛋白之DNA序列。

3.如上述权利要求之至少一项之筛选方法，其中该细胞为一微生物。

4.如上述权利要求之至少一项之筛选方法，其中该细胞为大肠杆菌且该细胞膜为大肠杆菌之内膜。

5.如上述权利要求之至少一项之筛选方法，其中步骤a)至f)对具有不同氨基酸序列之至少5种，较佳为至少10种，更佳为至少20种，更佳为至少50种，更佳为至少10²至10⁸种膜蛋白进行。

6.如上述权利要求之至少一项之筛选方法，其中步骤a)至f)对具有不同氨基酸序列之至少5种，较佳为至少10种，更佳为至少20种，更佳为至少50种，更佳为至少10²至10⁸种感测蛋白进行。

7.如上述权利要求之至少一项之筛选方法，其中该信号为一萤光信号、一生物发光(bioluminescence)信号或一吸收信号。

8.如上述权利要求之至少一项之筛选方法，其中该感测蛋白系择自Ca²⁺-特异性蛋白质感测子(protein sensors)与L-Glu-特异性蛋白质感测子之群组。

9.如上述权利要求之至少一项之筛选方法，其中该报导物质系择自由阳离子与氨基酸所组成之群组。

10.如上述权利要求之至少一项之筛选方法，其中该膜蛋白系择自由成孔膜蛋白(pore-forming membrane proteins)与膜运输蛋白(membrane transporters)所组成之群组。

11.如上述权利要求之至少一项之筛选方法，其中该膜蛋白系择自由孔蛋白(holins)、原型孔蛋白(pinholins)与离子通道(ion channels)所组成之群组。