[发明专利]抑制血管生成和血管功能的寡肽

说明书

本发明提供了抑制血管生成和血管功能的寡肽，该寡核苷酸长度为3～7个氨基酸，包含下列序列或由下列序列组成：X2‑X3‑X4，其中X2是碱性或酰胺氨基酸，X3是小氨基酸，且X4是在中性pH下带电荷的碱性氨基酸；或序列X1‑X2‑X3‑X4，其中X1是极性不带电荷的氨基酸，X2、X3和X4与X2‑X3‑X4中的X2、X3和X4相同；或序列X1‑X2‑X3‑X4‑X5‑X6‑X7，其中X1、X2、X3和X4与X1‑X2‑X3‑X4中的X1、X2、X3和X4相同，X5是小氨基酸，X6是疏水性氨基酸，且X7是疏水性氨基酸。

【发明领域】

本发明涉及抗血管生成寡肽。本发明还涉及该寡肽的药物组合物和用途。

【技术背景】

血管生成是从先前存在的血管系统形成新血管。它在发育过程中积极发生，决定组织的生长和分化。在成年生活中，血管生成仅限于女性的生殖事件以及由于伤口或骨折引起的组织修复。此外，癌症、糖尿病性视网膜病变和类风湿性关节炎等高影响疾病的进展取决于血管生成的病理刺激。因此，具有阻断血管生成能力的分子具有巨大的治疗潜力。

已经表征了几种内源性抗血管生成因子。其中许多是来自对血管生成过程没有活性的蛋白质的特异性蛋白水解的分子片段，包括细胞外基质和基底膜蛋白，以及生长因子、细胞因子、循环蛋白和激素。

血管抑制素是由蛋白酶(包括组织蛋白酶D、基质金属蛋白酶和骨形态发生蛋白1)特异性蛋白水解切割后激素催乳素(PRL)失去其第四个α-螺旋时产生的抗血管生成分子。PRL的前3个螺旋被命名为血管抑制素，因为它对血管生成和血管功能，即血管通透性和血管舒张有抑制作用。此外，已经报道了血管抑制素的非血管作用，例如纤溶作用、炎症作用、抗焦虑作用和神经作用。血管抑制素也称为16kDa的催乳素，缩写为PRL16K。此外，血管抑制素阻断不同的信号通路(Ras-Raf-MAPK、Ras-Tiam1-Rac1-Pak1、PI3K-Akt和PLCγ-IP3-eNOS)由促血管生成因子(VEGF、bFGF、缓激肽和IL1β)诱导。血管抑制素通过抑制内皮细胞的增殖、迁移和存活来阻断血管生成。此外，血管抑制素通过降低血管产生的一氧化氮来减少血管舒张和血管通透性，从而调节血管稳态。在动物研究中，血管抑制素诱导抑郁和焦虑相关行为。

已经表明，血管抑制素有助于对血管生成受到高度限制的血管器官和组织(例如视网膜和软骨)中的血管生成进行生理抑制。此外，血管抑制素作用在血管生成依赖性疾病如癌症、类风湿性关节炎、糖尿病性视网膜病以及围产期心肌病和先兆子痫的发病机制中起作用。

血管抑制素作用的分子机制仅是部分已知的。血管抑制素以高亲和力与内皮细胞膜结合，最近报道血管抑制素在内皮细胞表面与纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)、尿激酶纤溶酶原激活物(uPA)和尿激酶受体(uPAR)形成多聚体复合物。还显示血管抑制素通过其与整合素α5β1的特异性结合诱导内皮细胞凋亡。

血管抑制素不是单一分子种类，而是包含具有不同分子量的PRL片段家族，所述不同分子量由产生血管抑制素的蛋白酶的切割位点确定。这些片段包括成熟PRL的第1氨基酸至残基123、132、139、142、147、150或159。所有这些同种型都抑制血管生成，但它们的相对生物学效力未知。Moreno-Carranza,B.et alia,Sequence optimization andglycosylation of vasoinhibin:Pitfalls of recombinant production,ProteinExpression and Purification.161(2019)49-56公开了以高产率表达包含人催乳素前123个氨基酸的肽的困难，该肽具有良好的抗血管生成特性。

从US 7 300 920 B2已知抗血管生成肽与选自人胎盘催乳素、人生长激素或生长激素变体hGH-V的N末端的约10～约150个连续氨基酸基本相同，其中所述肽(i)抑制毛细血管内皮细胞增殖和组织；(ii)抑制鸡绒毛尿囊膜的血管生成；(iii)结合至少一种不结合完整的全长生长激素、胎盘催乳素或生长激素变体hGH-V的特异性受体。