[发明专利]样品的离焦显微图像

说明书

描述了用于包含细胞的身体样品的设备和方法。使显微镜(24)聚焦，使得显微镜(24)的焦平面至少近似地与属于样品的至少一些细胞被至少部分地置于的水平重合。在显微镜(24)的焦平面近似地与该水平重合时，获取样品的至少一幅聚焦显微图像。使显微镜(24)聚焦，使得显微镜的焦平面相对于该水平偏移，在显微镜(24)的焦平面相对于该水平偏移时，获取样品的至少一幅离焦显微图像。至少部分地基于聚焦图像和离焦图像确定样品的至少一部分的特性。还描述了其他应用。

相关申请的交叉引用

本申请要求2019年12月12日提交的Gluck等人的美国临时专利申请第62/946,985号和2020年7月7日提交的Gluck等人的美国临时专利申请第63/048,692号的优先权，这两项美国临时专利申请标题均为“Distinguishing between NRBCs and leukocytes”，这两项美国临时专利申请通过引用并入本文。

本发明实施方案的领域

本发明公开的主题的一些应用总体涉及身体样品的分析，并且特别地涉及对血液样品进行的光密度和显微测量。

背景

在一些基于光学的方法(例如，诊断和/或分析方法)中，通过进行光学测量来确定生物样品诸如血液样品的特性。例如，组分的密度(例如，每单位体积的组分的计数)可以通过对显微图像内的组分计数来确定。类似地，组分的浓度和/或密度可以通过对样品进行光吸收、透射、荧光和/或发光测量来测量。通常，将样品放置到样品载体中，并且对包含在样品载体的样品室中的样品的一部分进行测量。分析对包含在样品载体的样品室中的样品的一部分进行的测量，以便确定样品的特性。

哺乳动物的红细胞(red blood cell，即erythrocyte)是身体的氧气载体。红细胞在成熟过程期间经历去核，即细胞核从细胞中完全去除。通常，成年患者外周血中不存在有核红细胞(NRBC)。然而，在一些情况下(诸如新生儿、肿瘤患者、贫血患者等)，外周血中存在NRBC。

实施方案概述

如上文背景部分中描述的，哺乳动物的红细胞是身体的氧气载体。红细胞在成熟过程期间经历去核，即细胞核从细胞中完全去除。通常，成年患者外周血中不存在有核红细胞(NRBC)。然而，在一些情况下(诸如新生儿、肿瘤患者、贫血患者等)，外周血中存在NRBC。由于NRBC在尺寸和细胞核含量方面与一些白细胞(并且特别是淋巴细胞)类似，因此通常难以区分NRBC与白细胞。在本发明的一些应用中，对血液样品进行全血计数。在全血计数的情况下，为了避免对白细胞(特别是在具有低白细胞计数的患者中)过度计数和为了检测NRBC的存在(这可能指示潜在状况)，区分NRBC与白细胞通常是重要的。

根据本发明的一些应用，为了区分白细胞(例如，淋巴细胞)与NRBC(例如，在检测NRBC/白细胞候选物(即，可以是NRBC或白细胞的候选物)的情况下)，在将样品用具有一定波长(血红蛋白在该波长具有高吸收水平)的光照明时获取显微镜图像。通常，使用紫光，例如，具有在大于400nm和/或小于450nm(例如，400nm-450nm)范围内的波长的光。(注意，在文献中关于被称为在紫光范围内的波长范围存在一些变化。为了本申请的目的，紫光应解释为包括在400nm-450nm范围内的光。)在该波长范围内，血红蛋白的吸收与可见光光谱内的其他波长相比相对较高。通常，NRBC具有高的血红蛋白含量(每个细胞30皮克的量级)，而白细胞不含血红蛋白。因此，在紫光照明下获取的图像内，NRBC通常吸收光，而白细胞不吸收光。

通常，至少部分地基于在紫光照明下获取的图像内的NRBC/白细胞候选物的强度，然后将NRBC/白细胞候选物分类为NRBC或白细胞。对于一些应用，将强度阈值应用于在紫光条件下获取的图像(和/或其特定区域或像素)，并且基于NRBC/白细胞候选物的强度是否超过阈值，将NRBC/白细胞候选物分类为NRBC或白细胞。