[发明专利]从植物细胞表面获得材料的方法

说明书

本发明涉及一种使表达材料从植物细胞的表面或质外体脱离的方法，其中所述植物细胞在液体介质中用转子‑定子处理，其中通过转子旋转而引入的转子‑定子的比热最大为3 kJ每kg所述液体介质和每g/L所述植物细胞干质量，并且引入到所述介质中的比热功率最大为1.5 kJ每kg所述液体介质每分钟和每g/L所述植物细胞干质量。

发明领域

本发明涉及从细胞分离蛋白质。

发明背景

从细胞或细胞复合物分离蛋白质的方法包括渗透裂解、酶促或化学裂解、超声处理和机械消化。为了机械消化，通常均质器或混合器将细胞粉碎。

也可以使用短处理时间，以便分裂细胞复合物和使细胞处于悬浮状态，由此仅发生整个细胞量的部分裂解(Orellana-Escobedo 等人，Plant Cell Rep. 2015, 34(3):425-33)。

如果从单个细胞器或细胞区室分离蛋白质，通常在消化之前分离细胞器，然后使用分离物进行消化。

Witzel等人, Plant Methods 2011, 7:48；Leary等人, J Vis Exp. 2014;(94): 52113；和Córdoba-Pedregosa等人, Plant Physiology 1996, 112(3):1119-1125描述了从植物细胞的质外体中提取蛋白质的方法。将原生质体外部的空间称为质外体。它由细胞壁和细胞间隙组成。那些公开中描述的方法包括用不同的渗透溶液(例如盐)进行渗透提取和离心。然而，该方法的缺点在于，在该提取中，仅可提取可通过渗透获得的材料。

US 2015/0140644 A1和AU 2017 202473 B2描述了利用裂解细胞壁、孵育和提取的步骤从质外体获得蛋白质的方法。其中对蛋白质的酶促或化学修饰是可能的。

本发明的一个目的是提供改进的分离或提取质外体材料、特别是分泌到质外体中的材料的可能性。

发明简述

本发明涉及一种使表达材料从植物细胞的表面或从质外体中脱离的方法，其中植物细胞在液体介质中用转子-定子处理，其中通过转子旋转而引入的转子-定子的比热最大为3 kJ每kg液体介质和每g/L植物细胞干质量，并且引入到介质中的比热功率最大为1.5kJ每kg液体介质每分钟和每g/L植物细胞干质量。

同样地，在另一方面中，本发明涉及一种使表达材料从一种或多种植物细胞的表面或质外体脱离的方法，其中一种或多种植物细胞在液体介质中用转子-定子处理，其中通过转子旋转而引入的转子-定子的热量最大为30 kJ每kg液体介质，并且引入到介质中的热功率最大为1.5 kJ每kg液体介质和每分钟。

可以组合这两个方面的参数，特别是因为仅涉及不同的参考值，两种情况都符合本发明的精神。本文描述的所有详细的发明描述和优选实施方式涉及本发明的所有方面。

发明详述

本发明涉及对植物或植物细胞进行温和的转子-定子处理，与否则通常的均质化相反，该处理使材料从细胞或植物的质外体中脱离。在这种情况下，原生质体应保持基本完整，以避免要分离的表达材料被来自原生质体细胞内部的细胞成分污染。因此，根据本发明，用转子-定子处理的强度和持续时间受到限制。通过具有低能量输入(确定为比热或热功率)的转子-定子处理可以令人满意地使所需的表达材料脱离。在通过转子旋转而引入的转子-定子的比热最大为3 kJ每kg液体介质和每g/L植物细胞干质量时以及在通过转子旋转而引入到介质中的比热功率最大为1.5 kJ每kg液体介质每分钟和每g/L植物细胞干质量时可以发现出色的结果。等同于该发明构思，在通过转子旋转而引入的转子-定子的热量最大为30 kJ每kg液体介质时以及在引入到介质中的热功率最大为1.5 kJ每kg液体介质和每分钟时，获得了同样好的结果。根据本发明，在这种情况下，植物或植物细胞不被均质化，而仅被处理到使得表达材料从表面脱离或从质外体中脱离。