[发明专利]用于腺相关病毒的稳定剂和通过使用所述稳定剂稳定腺相关病毒的方法

说明书

提出了用于腺相关病毒(AAV)的稳定剂和使用所述稳定剂稳定腺相关病毒的方法。更具体地，本公开内容涉及用于腺相关病毒的稳定剂，其包含表面活性剂或白蛋白；腺相关病毒液体制剂，其包括腺相关病毒稳定剂；以及具有改善的稳定性的腺相关病毒的生产方法。当使用腺相关病毒产生基因递送病毒和治疗性纳米颗粒并为此目的形成另外的多酚结合物时，根据本公开内容的技术抑制病毒之间的过度聚集，从而将颗粒尺寸维持在用于药物递送的有效尺寸并改善液相的稳定性。因此，预期所述技术在用于基因疗法的药物递送技术领域中非常有用。

技术领域

本公开内容涉及用于腺相关病毒(AAV)的稳定剂和使用所述稳定剂稳定腺相关病毒的方法。更具体地，本公开内容涉及用于腺相关病毒的稳定剂，其包括表面活性剂或白蛋白；腺相关病毒液体制剂，其包括腺相关病毒和稳定剂；以及具有改善的稳定性的腺相关病毒的生产方法。

背景技术

基因疗法是通过基因转移和表达治疗疾病的技术。与药物疗法不同，基因疗法是通过靶向引起疾病的特定基因来纠正遗传缺陷的治疗。基因疗法的最终目的是通过遗传修饰活细胞获得有益的治疗效果。基因疗法的主要研究领域可以概括为引入对特定疾病具有治疗效果的基因，增强正常细胞对抗癌药物等显示出抗性的抗性功能，或者在患有各种遗传疾病的患者中替代修饰的或丢失的基因的领域。

用于基因疗法的基因递送技术可以主要分为使用病毒作为转运蛋白的方法(基于病毒载体的转移方法)，使用合成磷脂或阳离子聚合物等的非病毒递送方法，以及通过向细胞膜施加临时电刺激而引入基因的物理方法，如电穿孔。在以上递送技术中，基于病毒载体的转移方法使用治疗性基因替换基因而缺乏一些或全部复制能力的载体作为递送介质，并且是基因疗法的优选方法，因为可以有效地进行基因的递送。用作病毒媒介物或病毒载体的病毒包括RNA病毒载体(逆转录病毒载体、慢病毒载体等)和DNA病毒载体(腺病毒载体、腺相关病毒载体等)，此外还有单纯疱疹病毒载体、α病毒载体等。最近，有关慢病毒和腺相关病毒的研究已经在相关研究中积极进行(BRIC View2016-T22)。

腺相关病毒(AAV)是属于细小病毒科(Parvoviridae)和依赖性病毒属(Dependovirus)的单链原病毒。腺相关病毒不具有单独增殖的能力，并且需要与辅助病毒如腺病毒和痘苗病毒共存以进行复制。在腺相关病毒的生产中，用表达rep部分和cap部分的其它质粒DNA转染腺相关病毒，并加入腺病毒作为辅助病毒。

腺相关病毒是基因疗法中非常广泛使用的载体，因为腺相关病毒不在感染的细胞中复制，诱导相对温和的免疫应答，并且基因插入的位置在某种程度上是可预测的。然而，腺相关病毒通常产生野生型蛋白壳的遗传变体以提高生产效率或感染效率和靶标递送能力，并且这些病毒表面变化可降低在外部环境中的稳定性。特别地，由于重组腺相关病毒在水溶液中是不稳定的，因此随着时间的推移在聚集和表面吸附方面存在问题，因此在长期储存方面存在问题。特别地，即使当将功能性分子引入腺相关病毒的表面时，这种不稳定特性也是一个问题，并且大多数腺相关病毒在引入过程中聚集。这些聚集的病毒形成晶体并生长至10μm或更大的尺寸，从而诱导栓塞，其阻断血管并最终导致注射个体的死亡。

现有的提高腺相关病毒稳定性的技术集中在如何尽可能长时间储存腺相关病毒而不丧失腺相关病毒的感染性，但是防止功能性分子被引入表面时引起结晶的研究还没有很大进展。因此，有必要开发一种即使在引入功能性分子时也能保持稳定性，同时增强腺相关病毒本身的稳定性的技术。

公开内容

技术问题

在相关技术中使用腺相关病毒(AAV)作为基因载体的情况下，由于AAV在体内/体外溶液中的不稳定特点，发生AAV之间的聚集和表面吸附，导致不良的稳定性。此外，当用诸如多酚的材料对AAV进行表面改性时，会发生过度聚集，导致可能在体内引起栓塞的结晶颗粒的形成。本申请的发明人已经证实，通过表面活性剂或白蛋白处理显著抑制AAV之间的结晶颗粒的聚集和形成，并且长时间保持稳定性，从而完成本公开内容。

因此，本公开内容的目的是提供用于腺相关病毒(AAV)的稳定剂，包括表面活性剂或白蛋白。