[发明专利]产生E8,E10-十二碳二烯基辅酶A、可得蒙及其衍生物的酵母细胞和方法

权利要求书

1.一种能够产生E8,E10-十二碳二烯基辅酶A和任选地E8,E10-十二碳二烯-1-醇的酵母细胞，所述酵母细胞表达至少一种异源去饱和酶，所述至少一种异源去饱和酶能够在碳链长度为12的脂肪酰辅酶A中引入一个或多个双键，从而将所述脂肪酰辅酶A转化为去饱和脂肪酰辅酶A，其中所述去饱和脂肪酰辅酶A的至少一部分是E8,E10-十二碳二烯基辅酶A(E8,E10-C12:CoA)，其中：

a)所述至少一种去饱和酶是Cpo_CPRQ(SEQ ID NO:2)，或与其具有至少80％同一性，与SEQ ID NO:2具有如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％同一性的其功能变体；或

b)所述至少一种去饱和酶是至少两种去饱和酶，其中所述两种去饱和酶中的至少一种是Cpo_CPRQ(SEQ ID NO:2)，或与其具有至少80％同一性，与SEQ ID NO:2具有如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％同一性的其功能变体；所述另一种去饱和酶是能够在碳链长度为12的脂肪酰辅酶A中引入至少一个双键的去饱和酶，如Z9-12去饱和酶。

2.根据权利要求1所述的酵母细胞，其中所述至少一种去饱和酶是至少两种去饱和酶，其中所述另一种去饱和酶选自Cpo_NPVE(SEQ ID NO:67)、Cpo_SPTQ(SEQ ID NO:69)或与其具有至少80％同一性，与SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:69具有如至少81％、如至少82％、如至少83％、如至少84％、如至少85％、如至少86％、如至少87％、如至少88％、如至少89％、如至少90％、如至少91％、如至少92％、如至少93％、如至少94％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％同一性的其功能变体。

3.根据前述权利要求中任一项所述的酵母细胞，其中所述酵母细胞属于选自以下的属：布拉霉属、假丝酵母属、隐球菌属、小克银汉霉属、油脂酵母属、被孢霉属、毛霉属、须霉属、腐霉属、红冬孢酵母属、红酵母属、丝孢酵母属、酵母属和耶氏酵母属，任选地其中所述酵母细胞属于选自以下的物种：三孢布拉霉、铁红假丝酵母、C.revkaufi、热带假丝酵母、弯曲隐球菌、刺孢小克银汉霉、雅致小克银汉霉、山茶小克银汉霉、斯达油脂酵母、产油油脂酵母、高山被孢霉、深黄被孢霉、拉曼被孢霉、葡酒色被孢霉、卷枝毛霉、布拉克须霉、畸雌腐霉、圆红冬孢酵母、粘红酵母、瘦弱红酵母、禾本红酵母、胶红酵母、R.pinicola、普鲁兰丝孢酵母、皮状丝孢酵母、酿酒酵母和解脂耶氏酵母，优选地，所述酵母细胞是解脂耶氏酵母细胞或酿酒酵母细胞。

4.根据前述权利要求中任一项所述的酵母细胞，其中所述酵母细胞能够产生E8,E10-十二碳二烯-1-醇，所述酵母细胞还表达至少一种能够将至少部分所述去饱和脂肪酰辅酶A转化为去饱和脂肪醇的异源脂肪酰辅酶A还原酶(EC 1.2.1.84)，其中所述脂肪酰辅酶A还原酶能够将至少部分所述E8,E10-十二碳二烯基辅酶A(E8,E10-C12:CoA)转化为E8,E10-十二碳二烯-1-醇。

5.根据前述权利要求中任一项所述的酵母细胞，其中所述去饱和酶是在位置85具有突变如S85A突变的Cpo_CPRQ突变体，和/或其中所述至少一种异源去饱和酶是至少两种不同的异源去饱和酶，如SEQ ID NO:2中所示的Cpo_CPRQ和在位置85具有突变如S85A突变的Cpo_CPRQ的突变体。