[发明专利]组合物和制备方法

说明书

本发明涉及包含衍生自番木瓜(Caricapapaya)的丝氨酸蛋白酶的组合物、从水果来源中提取所述蛋白酶的方法及其化妆品和治疗用途，和相关试剂盒。

发明领域

本发明涉及包含在番木瓜(Carica papaya)植物中鉴定出的至少一种蛋白酶的组合物、用于产生来自番木瓜植物的所述组合物的方法、包含通过上述方法获得或可获得的所述至少一种蛋白酶的组合物、这种组合物在制备药物和化妆品中的用途、这种组合物在疾病和失调(包括伤口)的治疗中的用途、这种组合物在化妆品应用中的用途、以及用于实施本发明的方法或用途的相关试剂盒。

发明背景

许多类型的慢性伤口(包括但不限于糖尿病足溃疡、压力性溃疡、静脉性溃疡和动脉性溃疡)的有效管理，仍然是一项挑战。这种伤口可能需要大量时间来愈合或永远不会真正愈合，并且需要来自医学专业人士的大量资源。许多产品先前已经被开发出来以帮助伤口愈合，例如通过淀粉水解获得的D-葡萄糖多糖敷料，其含有抗坏血酸、I型胶原蛋白和α-生育酚乙酸酯(US 6,187,743)。

先前已经有对使用蛋白酶(例如木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶)用于伤口清创的关注。

发明概要

在通过用碱处理成熟木瓜(番木瓜(Caricapapaya))的果肉获得的滤液中，我们已鉴定出一种蛋白酶的存在，在该水果中所述蛋白酶先前未被鉴定为活性蛋白酶。我们已经证实，这种蛋白酶是丝氨酸蛋白酶，并且所述滤液含有丝氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶二者的活性。从医用蛆(medicinal maggots)分泌物中鉴定的丝氨酸蛋白酶(van der Plaset al.,2014,PLoS ONE 9(3):e92096)先前已被显示，通过降解纤溶酶原来增强纤溶酶原激活剂诱导的纤维蛋白溶解，并且这表明这可能归功于医用蛆清创伤口坏死组织的能力。

相应地，在第一方面，本发明提供了一种组合物，其包含提取自番木瓜(Caricapapaya)植物的成熟果实的活性丝氨酸蛋白酶，例如提取自经碱处理、经浆化的成熟番木瓜(Carica papaya)果实的活性丝氨酸蛋白酶。

在一个实施方案中，所述活性丝氨酸蛋白酶为实质上不含衍生自番木瓜(Caricapapaya)的不溶性材料。

在第二个实施方案中，所述丝氨酸蛋白酶包含与SEQ ID NO:1的第113至第771位氨基酸具有至少95、96、97、98或99％同源性(例如序列同一性)的连续氨基酸序列。在一个具体实施方案中，所述丝氨酸蛋白酶具有65至75kDa的分子量，例如大约70kDa。

在第三个实施方案中，所述丝氨酸蛋白酶具有45至55kDa的分子量并且包含与SEQID NO:1的第142至第618位氨基酸具有至少95％同源性的连续氨基酸序列。因此，本发明提供了一种组合物，其包含分离的、活性丝氨酸蛋白酶，所述丝氨酸蛋白酶具有45至55kDa的分子量并且包含与SEQ ID NO:1的第142至第618位氨基酸具有至少95％同源性的连续氨基酸序列。

本发明还提供了一种组合物，其包含实质上不含衍生自番木瓜的不溶性材料的分离的、活性丝氨酸蛋白酶，其中所述丝氨酸蛋白酶具有45至55kDa的分子量并且包含与SEQID NO:1的第142至第618位氨基酸具有至少95％同源性的连续氨基酸序列。

在第二方面，本发明提供了一种组合物，其包含衍生自或可衍生自番木瓜(Caricapapaya)的一种或多种活性丝氨酸蛋白酶和一种或多种衍生自或可衍生自番木瓜(Caricapapaya)的活性半胱氨酸蛋白酶的混合物。在一个实施方案中，所述一种或多种活性蛋白酶提取自成熟的番木瓜(Carica papaya)。在另一个实施方案中，所述一种或多种活性蛋白酶为使用重组表达系统产生的。