[发明专利]外泌体用于提高间充质干细胞组织修复功能的用途

说明书

本发明涉及外泌体用于提高间充质干细胞组织修复功能的用途。将本发明提供的修复肽与脂肪干细胞和表皮干细胞外泌体进行组合使用，可以有效的修复糖尿病小鼠的溃疡模型具有显著的促进糖尿病损失的修复，具有较好的应用前景和应用价值。

技术领域

本发明涉及生物领域，具体的，涉及外泌体用于提高间充质干细胞组织修复功能的用途。

背景技术

创伤所导致的慢性皮肤溃疡是糖尿病患者住院的原因之一，其病情复杂易反复，可导致严重的并发症，治疗相对棘手，治疗方法局限，且发病率逐年上升，是目前临床急于攻克的难题。已知创面愈合是一个复杂而精细的过程，由多种细胞和分子参与。目前研究显示已有超过数百个生理因素与糖尿病创面愈合不良有关，如生长因子降低、血管新生减少、巨噬细胞数目不多及功能受损、胶原沉积异常、角质细胞和成纤维细胞增殖减弱等。

间充质干细胞(Mesenchymalstemcells，MSC)是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层。MSC最初在骨髓中发现，临床应用于解决多种血液系统疾病、心血管疾病和自身免疫性疾病等，因其具有多向分化潜能、造血支持和免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。Kuo等研究了骨髓来源的问充质干细胞在链脲佐菌素诱导的增强型糖尿病大鼠模型创面愈合中的作用，结果显示与对照组相比较，间充质干细胞治疗组的小鼠创面面积显著减小，且创面完全愈合时间短于对照组，比较差异有统计学意义。组织学分析显示，与对照组相比，间充质干细胞组的局部促炎反应减弱，CD45的表达也有着明显的抑制。免疫组织化学分析指出，治疗组的表皮生长因子、血管内皮生长因子、脯氨酰4-羟化酶的表达与对照组相比显著增加。因此，骨髓问充质干细胞可显著增强糖尿病创面愈合，这为临床寻找有效的治疗方法提供了新的思路。人脐血源性内皮祖细胞(EPCs)因可促进新生血管形成常应用于各种缺血性疾病的治疗。但是，其在糖尿病创面愈合中起到的积极作用及相关机制却鲜有报道。Kim等以链脲佐菌素诱导的糖尿病的裸鼠为模型进行了相关研究，发现EPCs移植组的糖尿病创面中的角质形成细胞和成纤维细胞的增殖比PBS对照组早3d，从而显著加速了创面闭合。

此外，创面的上皮化对创面愈合极为重要，而相关研究表明表皮干细胞对创面上皮化具有重要的作用，说明表皮干细胞对创面愈合有着积极的意义。糖尿病创面中异常分布的表皮干细胞较正常皮肤活性低、数量少，不能有效地使糖尿病创面在普通时间内愈合，提示糖尿病中已有的表皮干细胞在修复创面愈合过程中没能发挥应有的作用。以表皮干细胞为种子细胞，培养组织工程皮肤，促进创面愈合，避免皮片移植时皮源缺乏及供皮区瘢痕等一系列问题。胡葵葵等利用表皮干细胞构建复合皮肤修复裸鼠创面，新生皮肤增殖能力强，生长速度和皮肤质量均较为理想。若以包含有表皮干细胞的复合皮肤或者干细胞膜片修复糖尿病创面，增强其愈合能力，有可能为治疗糖尿病创面提供一个较为理想的方式。

近年来的研究表明，干细胞所发挥的组织修复与再生功能，不仅因其在损伤部位的增殖和分化，很大程度上是由其旁分泌作用实现的。间充质干细胞来源外泌体（MSC-exo）中的RNA 或者蛋白能够发挥细胞归巢作用，并调节细胞的增殖与分化，可以限制损伤、调节免疫反应以及促进细胞损伤后的自我修复和组织再生。Baglio 等分离由人骨髓和脂肪间充质干细胞分泌的外泌体，并通过电子显微镜标记、蛋白分析、RNA 测序等方法，证实人骨髓和脂肪间充质干细胞分泌的外泌体富含特异性miRNA 和tRNA。Quesemberry 等提出，MSC-exo 扮演着干细胞生物学上的关键角色，推测外泌体在促进细胞新生以及组织损伤修复方面有重要作用。但是目前还没有将外泌体用于糖尿病组织修复中应用。

发明内容

本发明克服现有技术的缺陷，提供一种采用脂肪干细胞和表皮干细胞外泌体协同修复肽一起促进糖尿病损伤修复中的应用。

此外，还提供一种能够促进糖尿病损伤修复的多肽的筛选方法及筛选获得的多肽。

具体的，所述修复肽能够特异性的促进人角质细胞以及人正常成纤维细胞的增殖，特别是在高糖环境下的增殖。