[发明专利]一种抗贾第虫作用靶点的锌脂蛋白及医用用途

说明书

本发明提供了一种抗贾第虫作用靶点的锌脂蛋白及医用用途，发现了能显著抑制虫体繁殖的蛋白ZFD，其通过作用于贾第虫TRBD抑制贾第虫的繁殖，降低端粒酶活性以及影响端粒长度；本发明为贾第虫的治疗提供了新的靶点ZFD，为未来药物干预贾第虫病奠定基础。新的端粒酶相关蛋白，找出针对端粒酶的作用靶点是抗贾第虫药物开发的新途径。

技术领域

本发明提供了一种抗贾第虫作用靶点的锌脂蛋白，做为一种新的抗贾第虫作用靶点，可用于开发抗贾第虫药物，属于抗寄生虫技术领域。

背景技术

十二指肠贾第虫（Giardia duodenalis），简称贾第虫（Giardia），作为人兽共患寄生虫主要寄生在人和某些哺乳动物的小肠内，引起以腹泻为主要特征的贾第虫病，严重危害人体以及其他动物的健康。目前控制贾第虫病还是主要依靠抗贾第虫药的使用，如：甲硝唑等，但是由于耐药性的产生，迄今尚无理想的控制贾第虫病的药物和疫苗。由于贾第虫可以在体外反复传代出现“永生化”，其调控又与端粒密切相关。端粒是一种特殊核蛋白复合体，位于真核细胞染色体的末端，在染色体定位、复制、保护和控制细胞生长及寿命方面具有重要作用，并与细胞凋亡、细胞转化和永生化密切相关。端粒酶是负责端粒延长的一种酶，可将端粒DNA加至真核细胞染色体末端，在保持端粒稳定、基因组完整、细胞长期的活性等方面有重要作用。而端粒酶活性调节又与端粒酶相关蛋白有关。

发明内容

本发明目的是提供一种的抗贾第虫作用靶点--其可调控贾第虫端粒酶活性，进而起到抗贾第虫作用。

本发明公开的一种贾第虫锌脂蛋白（以下缩写：ZFD），其基因序列如：SEQ No 1所示，分子式为：C₉₂₃H₁₄₃₈N₂₇₄O₂₉₅S₁₅，相对分子质量为21.6KD，等电点为 6.70；应用SWISS-MODEL对ZFD进行3D结构预测，结果如图1所示。

本发明所述的贾第虫锌脂蛋白作为抗贾第虫药物作用的靶点。

本发明所述的贾第虫锌脂蛋白在制备抗贾第虫药物中的医用用途。

本发明的贾第虫锌脂蛋白靶点是一种贾第虫端粒酶逆转录酶（telomerasereverse transcriptase，TERT)中端粒酶RNA结合域（telomeraseRNA-binding domain，TRBD）结构域的互作蛋白，转入锌脂蛋白的核酶能够显著降低锌脂蛋白的表达，对虫体的繁殖有明显的影响。采用TRAP法检测核酶对贾第虫端粒酶活性影响，结果发现锌脂蛋白表达水平的降低，下调了贾第虫的端粒酶活性。

本发明采用RT-PCR法检测贾第虫核酶实验组以及对照组的端粒长度，结果显示端粒长度低于阴性对照组，表明ZFD表达水平的降低影响了端粒的长度。

本发明的积极效果在于：

公开了一种新的贾第虫锌脂蛋白，发现了能显著抑制虫体繁殖的蛋白ZFD，其通过作用于贾第虫TRBD抑制贾第虫的繁殖，降低端粒酶活性以及影响端粒长度；本发明为贾第虫的治疗提供了新的靶点ZFD，为未来药物干预贾第虫病奠定基础。新的端粒酶相关蛋白，找出针对端粒酶的作用靶点是抗贾第虫药物开发的新途径。

附图说明

图1本发明ZFD蛋白3D结构预测图；

图2本发明ZFD核酶对贾第虫的端粒酶活性的抑制效果（M：DNA分子量(DL500 DNAMarker)；1：HeLa细胞TRAP产物（对照）；2：转染正常贾第虫对照组；3：转染含有空载体贾第虫对照组；4：转染含有pC631-SNAP-Ham-GDH载体的贾第虫对照组；5：转染含有pC631-SNAP-Ham-ZFD载体的贾第虫组）；

图3本发明ZFD端粒电泳验证PCR结果（贾第虫端粒PCR结果：M：50 bp DNA Ladder；1：端粒1引物PCR结果；2：端粒2引物PCR结果；3：内参PCR结果）；