[发明专利]一种大麦苗中活性黄酮成分群鉴定及其快速检测方法

权利要求书

1.一种大麦苗中活性黄酮成分群鉴定及其快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、对大麦苗80％醇提物采用正丁醇进行萃取，获得富集活性黄酮的正丁醇部位；

B、正丁醇部位用水完全溶解后，上D101大孔树脂柱层析，收集20-50％乙醇洗脱部位为活性部位；

C、采用葡聚糖凝胶、ODS、C18、MCI凝胶柱色谱和高效液相色谱多种分离方法，结合DPPH薄层生物自显影技术进行活性追踪，分离、鉴定到主要的抗氧化活性黄酮单体成分，确定大麦黄苷、皂草苷、异荭草素-7-O-[6-阿魏酰基]-葡萄糖苷、异牡荆素-7-O-[6-阿魏酰基]-葡萄糖苷和异荭草素-2”-O-(6-阿魏酰基)-葡萄糖苷为大麦苗中黄酮类功能成分群的品质评价指标；

D、以上述鉴定到的活性黄酮单体成分为标准品，采用大麦苗中活性黄酮成分混标同步检测的高效液相色谱方法检测黄酮成分的含量；

所述的大麦苗中活性黄酮成分混标同步检测的高效液相色谱方法包括以下步骤：

a、对照品储备液的制备：取大麦黄苷、皂草苷、异荭草素-7-O-[6-阿魏酰基]-葡萄糖苷、异牡荆素-7-O-[6-阿魏酰基]-葡萄糖苷和异荭草素-2”-O-(6-阿魏酰基)-葡萄糖苷对照品，加入溶剂溶解配制成所需浓度的对照品溶液；

b、样品溶液的制备：取大麦苗粉过筛，精密称定，加入30％乙醇溶液，超声提取15min，过滤，取续滤液过0.45μm微孔滤膜，作为供试样品溶液；

c、大麦苗中5种活性黄酮成分的含量测定：分别将对照品溶液和样品溶液用高效液相色谱仪在同一色谱条件下的进行分析，以峰面积外标法计算5种黄酮成分的含量。

2.根据权利要求1所述的大麦苗中活性黄酮成分群鉴定及其快速检测方法，其特征在于，所述的步骤C，采用DPPH抗氧化活性追踪的方法，确定活性部位；再采用MCI反相柱色谱、ODS柱色谱、葡聚糖凝胶柱色谱和高效液相色谱多种分离方法，结合DPPH薄层生物自显影技术，进行活性追筛、分离与纯化，得到单体化合物；对得到的单体化合物进行DPPH抗氧化活性评价，选取含量高、活性好的单体黄酮化合物作为大麦苗中黄酮类功能成分群的品质评价指标。

3.根据权利要求1所述的大麦苗中活性黄酮成分群鉴定及其快速检测方法，其特征在于，所述的步骤b中，大麦苗粉与加入的30％乙醇溶液的料液比为1:100(g/mL)。

4.根据权利要求1所述的大麦苗中活性黄酮成分群鉴定及其快速检测方法，其特征在于，所述的步骤b，样品溶液制备方法为：取大麦苗粉过筛0.2g，精密加入20mL 30％乙醇溶液，称定重量，超声提取15min，取出放凉，用30％乙醇补重，摇匀，过滤，取续滤液过0.45μm微孔滤膜，作为供试样品溶液。

5.根据权利要求1所述的大麦苗中活性黄酮成分群鉴定及其快速检测方法，其特征在于，所述的步骤c中，所用色谱柱型号为T3，4.6×250mm，5μm，检测波长为345nm，色谱柱的柱温设定为30℃，进样量为10μL。

6.根据权利要求1所述的大麦苗中活性黄酮成分群鉴定及其快速检测方法，其特征在于，所述的步骤c中，液相色谱分析中的流动相为A％乙腈/B％0.2％甲酸水，梯度洗脱程序为0-25min，12％A，流速1.2mL/min；25-55min，12-20％A，流速1.2-1.5mL/min；55-60min，20-25％A，流速1.5-1.0mL/min。