[发明专利]壮骨关节丸指纹图谱及其中18种成分的检测方法

说明书

本发明公开了壮骨关节丸指纹图谱及其中18种成分的含量研究。本发明涉及化学分析中中成药药物成分的检测技术领域，采用Agilent Eclipse XDB‑C18色谱柱，流动相为乙腈‑0.1％乙酸水；梯度洗脱；检测波长为254nm；对16批壮骨关节丸进行主成分分析及相似度评价。该方法操作简单，专属性强，易于分析评价。此方法可以更加证实壮骨关节丸的成分及含量，确保中成药临床用药的安全性、有效性和稳定性。

技术领域

本发明涉及化学分析中中成药主要成分检测技术领域，特别涉及壮骨关节丸18种成分含量研究。

背景技术

壮骨关节丸是一种治疗由肝肾不足、血瘀气滞、脉络痹阻所致的骨性关节炎、腰肌劳损的中成药，由以下中药组成：狗脊、淫羊藿、独活、骨碎补、续断、补骨脂、桑寄生、鸡血藤、熟地黄、木香、乳香、没药。

壮骨关节丸是中国药典中的成方制剂，能够有效治疗骨关节病。而原儿茶酸(protocatechuicacid)、毛蕊花糖苷(acteoside)、柚皮苷(naringin)、朝藿定A(epimedinA)、朝藿B(epimedin B)、槲皮素(quercetin)、淫羊藿苷、补骨脂素(psoralen)、异补骨脂素(isopsoralen)、花椒毒素(8-Methoxypsoralen)、刺芒柄花素(formononetin)、补骨脂定(psoralidin)、宝藿苷Ⅰ(baohuosideⅠ)、补骨脂甲素(bavachin)、蛇床子素(osthole)、木香烃内脂(costundide)、补骨脂酚(bakuchiol)、11-羰基-β-乙酰乳香酸(acetyl-11-keto-β-boswellic acid)等18种成分为治疗骨性关节炎的中成药的主要成分。基于高效液相色谱法(HPLC)测定壮骨关节丸中单个或多个有效成分含量的研究较多，但还没有建立同时涵盖十二味组方中药材的HPLC指纹图谱，而且在历版《药典》中也未收载该制剂的质量标准，因此本实验对壮骨关节丸进行指纹图谱研究，使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2012版)对16批市售制剂进行相似度评价，进而对指纹图谱中主要特征峰进行化学指认并初步确定组方中药来源，为制定全面、整体的壮骨关节丸质量控制方法提供一些工作基础。

发明内容

为解决现有市场上16批次壮骨关节丸未同时涵盖的18种成分的的指纹图谱相似度问题，本申请公开了壮骨关节丸指纹图谱及其中18中成分的检测方法。

本发明是通过以下步骤得到的：

(1)取壮骨关节丸袋中丸粒高速粉碎，精密称定约1.25g，置于50mL锥形瓶中，加入体积分数为60％甲醇25mL，称重，超声处理45min，取出放冷至室温，补足减少重量，摇匀，提取液于12000r/min离心1min，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液即得。

(2)壮骨关节丸指纹图谱的研究：

a专属性实验取空白溶剂(体积分数为60％甲醇)和壮骨关节丸的供试品溶液各1份，分别进样10μL，记录色谱图(见图1)。经考察，空白溶剂对供试品溶液的测试不存在干扰，专属性良好。

b精密度实验取同一份壮骨关节丸的供试品溶液，按“权利要求书6”色谱条件连续进样6次，记录色谱图，进行精密度考察，40个共有峰的相对保留时间的RSD不高于0.11％，相对峰面积的RSD不高于1.87％，各色谱图的相似度值不低于0.99。上述实验结果表明，仪器的精密度好。

c稳定性实验取同一份壮骨关节丸的供试品溶液，按“权利要求书6”色谱条件，分别在0、4、8、12、24h进样分析，记录色谱图。结果显示40个共有峰的相对保留时间的RSD值不高于0.21％，相对峰面积的RSD值不高于1.99％，各色谱图的相似度值不低于0.99。上述实验结果表明，供试品在24h内测定稳定性良好。