[发明专利]检测黄曲霉毒素B1的探针组、试剂盒及其应用

权利要求书

1.探针组，包括：

适体探针H1-S1，由发夹探针H1和用于结合靶标的适体序列S1杂交而成；所述发夹探针H1包括环状区和茎秆区，所述环状区为部分G-四链体序列，剩余部分G-四链体序列位于茎秆区；所述发夹探针H1的5’末端具有凸出的单链DNA序列1，所述发夹探针H1的3’末端具有凸出的单链DNA序列2；所述DNA序列1和DNA序列2分别与适体序列S1两端的序列互补杂交并形成平末端；

发夹探针H2，包括环状区和茎秆区，所述环状区为部分G-四链体序列，剩余部分G-四链体序列位于茎秆区；所述发夹探针H2的5’末端具有凸出的单链DNA序列3，所述发夹探针H2的3’末端为凹末端；所述发夹探针H2中DNA序列3以及与其相连的部分茎秆区序列能够与所述发夹探针H1中DNA序列1以及与其相连的部分茎秆区序列互补杂交。

2.根据权利要求1所述的探针组，其特征在于，所述G-四链体序列的长度为18个碱基，其中12个碱基位于环状区，剩余6个碱基位于茎秆区。

3.根据权利要求1或2所述的探针组，其特征在于，所述适体序列S1的核苷酸序列如SEQID NO.1所示；所述发夹探针H1的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述发夹探针H2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

4.检测黄曲霉毒素B1的试剂盒，其特征在于，包括权利要求3所述的探针组。

5.根据权利要求4所述检测黄曲霉毒素B1的试剂盒，其特征在于，

还包括独立包装的核酸外切酶I。

6.根据权利要求4或5所述检测黄曲霉毒素B1的试剂盒，其特征在于，

所述试剂盒还包括独立包装的氯化血红素、鲁米诺和/或H₂O₂。

7.检测黄曲霉毒素B1的传感器系统，其特征在于，包括权利要求3所述的探针组，或，权利要求4-6任一项所述的试剂盒。

8.根据权利要求7所述检测黄曲霉毒素B1的传感器系统，其特征在于，

在所述的传感器系统中，所述适体探针H1-S1的浓度为30-50nmol/L，所述发夹探针的浓度为40-60nmol/L，核酸外切酶I的用量为8-12U。

9.根据权利要求8所述检测黄曲霉毒素B1的传感器系统，其特征在于，以总体积为200μL为计，包括：

第一反应液，包括：

适体探针H1-S1，浓度为0.6-1μmol/L，10μL；

核酸外切酶I，浓度为8-12 U/μL，1μL；

第一缓冲液，39μL；

第二反应液，包括：

发夹探针H2，浓度为0.8-1.2μmol/L，10μL；

第二缓冲液，40μL。

10.根据权利要求9所述检测黄曲霉毒素B1的传感器系统，其特征在于，

还包括第三反应液，包括：

氯化血红素，浓度为2 μmol/L，10 μL；

鲁米诺，浓度为1mmol/L，25 μL；

H₂O₂，浓度为1mmol/L，25 μL；

第三缓冲液，40μL。

11.根据权利要求10所述检测黄曲霉毒素B1的传感器系统，其特征在于，

所述第一缓冲液和第二缓冲液为1 × NEBuffer3.1缓冲液；和/或

所述第三缓冲液为HEPES缓冲液。

12.一种检测黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，包括利用权利要求3所述的探针组，权利要求4-6任一项所述的试剂盒，和/或，权利要求7-11任一项所述的传感器系统检测黄曲霉毒素B1的步骤。