[发明专利]一种运用数字PCR进行胎儿分数检测的方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种运用数字PCR进行胎儿分数检测的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、提取样本中的DNA：从孕妇外周血中提取DNA，得到样品DNA；

步骤二、将步骤一得到的样品DNA、多重PCR反应酶和目标基因的引物混匀后，进行数字PCR反应；

其中，所述目标基因的部分序列在孕妇外周血和胎儿胎盘细胞中存在超甲基化状态或低甲基化状态；所述目标基因的引物包含以下碱基序列：

GGGUUGGGAAGAAACUGUGGCACUUCGGUGCCAGCAACCC；

在所述数字PCR反应中，所述目标基因的引物包含三维结构，所述目标基因的引物包含不少于十个碱基的特殊核酸序列N，所述特殊核酸序列N只由腺嘌呤、鸟嘌呤和胸腺嘧啶组成。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述目标基因的部分序列在孕妇外周血和胎儿胎盘细胞的甲基化状态不同。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其中，所述数字PCR反应所采用的反应液不包含三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸组分。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括：将所述目标基因的引物进行预处理，所述预处理的方法为：将合所述目标基因的引物加入到缓冲液B中加热至65~70℃，保温5~10分钟，然后冷却至30~35℃，保温25~30分钟。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤二所述数字PCR使用了至少十对引物，同时进行目标基因的检测。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述缓冲液B的组分包括300~320 mMNaCl，5~7 mM MgCl₂，20~25 mM Tris (pH 7.6)，1~5μM茶多酚。

7.一种运用数字PCR进行胎儿分数检测的试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒通过数字PCR完成无创产前胎儿染色体多倍体的检测，所述检测试剂盒使用的引物包含不少于十个碱基的特殊核酸序列N，所述特殊核酸序列N只由腺嘌呤、鸟嘌呤和胸腺嘧啶组成。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒使用的反应液不包含三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸组分。

9.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒使用的引物包含三维结构。

10.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒使用了至少十对引物，同时进行目标序列的检测。