[发明专利]一种鹅星状病毒纤突蛋白脂质体疫苗及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种鹅星状病毒纤突蛋白脂质体疫苗，其特征在于，包括：脂质体，以及结合或包裹于脂质体中的VP27蛋白；

脂质体由卵磷脂、胆固醇、抗氧化剂按薄膜扩散法制得，其中抗氧化剂为维生素E、维生素A、维生素C中至少一种。

2.一种如权利要求1所述鹅星状病毒纤突蛋白脂质体疫苗制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、将卵磷脂、胆固醇、抗氧化剂混合，溶于有机溶剂中，减压旋蒸除去有机溶剂，得到膜状空白脂质体，其中有机溶剂为乙醇、乙醚、氯仿中至少一种；

S2、向膜状空白脂质体中加入pH值为7.3-7.5的磷酸盐缓冲液和玻璃珠，水平摇床进行水化得到混悬液；

S3、将混悬液分离，加入VP27蛋白溶液，超声处理得到鹅星状病毒纤突蛋白脂质体疫苗。

3.根据权利要求2所述鹅星状病毒纤突蛋白脂质体疫苗制备方法，其特征在于，S1中，卵磷脂为大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、二油酰基卵磷脂、二油酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰胆碱中至少一种；

S1中，卵磷脂、胆固醇、抗氧化剂的质量比为1.5-2.5：0.8-1.2：0.06-0.14。

4.根据权利要求2所述鹅星状病毒纤突蛋白脂质体疫苗制备方法，其特征在于，S2的水化过程中，水化温度为36-38℃，摇床转速为180-220r/min，水化时间为0.8-1.2h。

5.根据权利要求2所述鹅星状病毒纤突蛋白脂质体疫苗制备方法，其特征在于，S3的超声处理过程中，超声功率为950-1050w，其中每工作5s间歇5s为1个周期，每60个超声处理周期后停止1min，超声处理总时间为32min。

6.根据权利要求2所述鹅星状病毒纤突蛋白脂质体疫苗制备方法，其特征在于，S3的超声处理过程中保持冰浴，超声结束后除菌过滤。

7.根据权利要求2所述鹅星状病毒纤突蛋白脂质体疫苗制备方法，其特征在于，S3中，VP27蛋白溶液采用如下工艺制备：将鹅星状病毒接种于病毒培养基中培养48-72h，提取RNA，反转录，PCR扩增获得VP27基因；将VP27基因和pCold质粒分别双酶切后连接，转化至大肠杆菌Rosetta中，低温诱导表达，纯化得到VP27蛋白溶液。

8.根据权利要求2所述鹅星状病毒纤突蛋白脂质体疫苗制备方法，其特征在于，S3中，加入VP27蛋白溶液后，向体系中加入蛋白酶抑制剂，然后进行超声处理；

蛋白酶抑制剂为抑肽酶、亮抑蛋白酶肽、EDTA中至少一种，蛋白酶抑制剂在体系中浓度为1.5-2.5μg/mL。

9.如权利要求1所述鹅星状病毒纤突蛋白脂质体疫苗在制备预防或治疗雏鹅痛风病的药物中的应用。