[发明专利]一种检测4种食源性致病寄生虫的探针、芯片、试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种检测4种食源性致病寄生虫中一种或多种的探针组合，属于微生物检测技术领域。其中，所述4种食源性致病寄生虫为广州管圆线虫、微小隐孢子虫、刚地弓形虫和猪肉绦虫。本发明还公开了利用上述探针组合制备的基因芯片、试剂盒和检测方法。利用本发明对4种食源性致病寄生虫进行检测，特异性强、灵敏度高，准确性好，并且方便、快速，尤其适用于寄生虫载量低的样本检测，为感染诊疗和食品安全检测提供更好的技术支持。

技术领域

本发明属于微生物检测技术领域，具体地，涉及一种检测4种食源性致病寄生虫的探针、芯片、试剂盒及方法。

背景技术

食源性致病寄生虫病是当今世界上最关注的公共卫生问题之一，是由寄生虫通过多种途径污染食品和饮水后，因生食或半生食含有感染期寄生虫的食物和水进入人体，引起人的食源性致病寄生虫病的发生。近年来，食源性致病寄生虫病已成为新“富贵病”，特别是沿海经济发达地区的城镇居民的感染人数呈上升势头，且我国食源性致病寄生虫病具有分布广、对人畜危害严重等特点。

食源性致病寄生虫主要包括吸虫、绦虫、弓形虫和旋毛虫和孢子虫等。传统的食源性致病寄生虫的检测技术有染色涂片检查、漂浮集卵法、沉淀集卵法、麦氏计数法和影像学等，传统的方法操作复杂、周期过长、阳性率低等局限，不能满足食品安全快速检测的需求，也不利于食源性致病寄生虫感染等事件的处理。而近年来发展了一系列病原体核酸分子检测技术，包括PCR、基因芯片、高通量测序基因检测等。PCR具有较好的特异性及灵敏度，但每次只能检测一种致病菌，存在通量低的缺陷，而二代测序技术虽然检测的病原范围大，但周期较长（24h以上）、灵活度低、成本高、整个过程比较复杂，尤其是数据的解读，目前仍然存在一定的困难。而基因芯片既具备高灵敏性和特异性，且成本较低、操作灵活、时效性高、针对性强，使得其十分适用于对特定类型样本的病原检测，适合临床和食品安全检测的应用。

基因芯片（GeneChip）又称为微阵列技术（MicroArray），主要包括5个技术环节：探针构建、芯片制备、样品制备、芯片实验、信号检测及结果判读。基因芯片上的探针设计是体现芯片检测效能的核心因素之一，然后现有的特异性探针序列设计算法均从微生物的保守基因如细菌的16SrRNA、真菌的ITS等进行挖掘，且采用长序列比对的方式，故算法程序缺乏足够的灵活性，且探针序列缺乏足够的覆盖度和灵敏性。不能满足大规模的寄生虫检测基因芯片的设计要求。此外，现有的芯片设计方法未考虑微阵列上荧光信号的区域不均匀性而对各类探针的排布进行设计，现有的芯片设计方法缺乏荧光信号的标准化处理。

发明内容

为了解决上述技术问题中的至少一个，本发明采用的技术方案如下：

本发明第一方面提供一种检测4种食源性致病寄生虫中一种或多种的探针组合，其中，所述4种食源性致病寄生虫为广州管圆线虫、微小隐孢子虫、刚地弓形虫和猪肉绦虫。

广州管圆线虫（Angiostrongylus cantonensis）是引起广州管圆线虫病（食源性寄生虫病）的病原体，其成虫寄生于鼠的肺动脉内，人是该虫的非正常宿主。人因生食或半生食含有该寄生虫幼虫的褐云玛瑙螺、福寿螺、蜗牛或蔬菜而感染该虫幼体，感染人体后其幼虫移行至机体中枢神经系统，并引发嗜酸性脑炎和脑膜脑炎，其症状常表现为剧烈头痛、恶心、喷射性呕吐和颈项强直等神经系统症状。该病在热带和亚热带地区流行，在我国呈散在分布，多发生于沿海地区。

微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum）是一种呈全球性分布的重要食源性/水源性人兽共患的机会性致病，专性胞内寄生虫，感染后寄生于哺乳动物和人体小肠中，是重要的腹泻病原之一，该虫体感染引起的隐孢子虫病多见于免疫功能低下或免疫缺陷人群，表现为急慢性腹泻，并伴有发热、恶心、咳嗽及呼吸困难等症状。