[发明专利]一种绿色荧光蛋白标记重组虹彩病毒的构建及其应用

权利要求书

1.绿色荧光蛋白标记重组虹彩病毒的构建方法，其特征在于，包括步骤：

1）构建重组质粒，选择石斑鱼虹彩病毒的ORF72R基因的C端作为eGFP和Flag标签的插入位点，重组质粒中含有与eGFP和Flag标签融合的ORF72R基因；

2）重组病毒由野生型病毒与重组质粒之间通过同源重组而来，重组质粒通过脂质体转染法进入处于生长对数期的石斑鱼胚胎干细胞，然后对所述石斑鱼胚胎干细胞接种野生型虹彩病毒；

3）收集受感染的细胞，筛选出带有绿色荧光的细胞，提取细胞内病毒即为绿色荧光蛋白标记重组虹彩病毒；

4）将筛选出纯化的绿色荧光蛋白标记重组虹彩病毒扩大培养后，以蔗糖密度梯度离心的方法分离，所述绿色荧光蛋白标记重组虹彩病毒悬浮于50-60%蔗糖溶液中。

2.根据权利要求1所述的绿色荧光蛋白标记重组虹彩病毒的构建方法，其特征在于，步骤4）后还包括步骤：

5）通过蛋白质印迹法鉴定步骤4）所得的绿色荧光蛋白标记重组虹彩病毒。