[发明专利]一种促进细胞存活的Netrin-1模拟肽、Netrin-1截短多肽及其应用

说明书

本发明提供了一种促进细胞存活的Netrin‑1模拟肽、Netrin‑1截短多肽及其应用，属于人工突变多肽技术领域。截短体Pep407为Netrin‑1的第407～443位氨基酸序列，是Netrin‑1与受体DCC结合的关键氨基酸序列，Pep407能与受体DCC结合激活Netrin‑1下游信号通路，模拟Netrin‑1生物学活性。本发明还提供了一种更短的模拟肽(Netrin‑1的第407～422位氨基酸序列)，该模拟肽不仅能与受体DCC结合能激活Netrin‑1下游信号通路，而且能有效抑制细胞死亡，促进细胞存活，同时通过添加穿膜肽给药出血性脑卒中小鼠模型，能有效达到治疗出血性脑卒中的效果。

技术领域

本发明属于人工突变多肽技术领域，具体涉一种促进细胞存活的Netrin-1模拟肽、Netrin-1截短多肽及其应用。

背景技术

Netrin-1是神经系统分泌的导向因子，能够与受体DCC相互作用，激活下游信号通路，发挥抑制细胞凋亡，促进神经突起生长的功能。现有技术已有多篇文献报道在模拟人类脑卒中的大/小鼠的脑缺血模型、脑出血模型及蛛网膜下出血模型中进行损伤区域的脑立体定位注射Netrin-1全长蛋白或过表达Netrin-1的腺相关病毒，可以在局部表达大量的Netrin-1蛋白。这些大量聚集的蛋白随后能够与膜上受体结合进而激活细胞内的信号传递，最终实现了有效改善模型动物行为学，并能大大减少/改善损伤过程导致的细胞凋亡、血脑屏障完整性、炎症反应。

全长形式的Netrin-1存在分子量太大无法通过血脑屏障，具有丝裂原活性存在潜在机体致癌率，目的蛋白片段太长不易大规模工业化生产的问题，因此如能围绕Netrin-1开展潜在多肽药物设计有着巨大的现实意义。DCC作为Netrin-1重要的受体之一，被报道参与脑出血中Netrin-1减少细胞死亡，维持血脑屏障，改善模型小鼠行为学的过程中。为了解决血脑屏障的问题，同时降低对机体的致癌率，通过进一步缩小最小有效结构域，找到Netrin-1模拟肽用于神经保护作用具有重要的药物研究价值。目前尚未有关于Netrin-1的模拟肽的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种促进细胞存活的Netrin-1模拟肽及其应用，所述Netrin-1模拟肽不仅能激活Netrin-1下游信号通路，而且能有效改善出血性脑卒中小鼠模型的神经认知功能、减小脑血肿体积以及抑制神经元死亡。

本发明的目的还在于提供一种Netrin-1截短体及其应用，能够与DCC受体结合，也能激活Netrin-1下游信号通路，模拟Netrin-1生物学活性。

本发明提供了一种Netrin-1的截短体Pep 422，所述Netrin-1的截短体Pep 422的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明提供了一种促进细胞存活的Netrin-1模拟肽，包括穿膜肽-结合肽；

所述结合肽为所述Netrin-1的截短体Pep 422。

优选的，所述Netrin-1模拟肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明提供了所述Netrin-1的截短体Pep 422或所述促进细胞存活的Netrin-1模拟肽在制备预防和/或治疗出血性脑卒中的药物中的应用。

本发明提供了所述Netrin-1的截短体Pep 422或所述促进细胞存活的Netrin-1模拟肽在制备神经保护的药物中的应用。

本发明提供了一种Netrin-1的截短体Pep 407，所述Netrin-1的截短体Pep 407的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。

本发明提供了一种具有Netrin-1活性的人工模拟肽，包括穿膜肽-结合肽；所述结合肽为所述Netrin-1的截短体Pep 407。

优选的，所述人工模拟肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。