[发明专利]一种用于检测恶性疟和间日疟的试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测恶性疟和间日疟的试剂盒，所述试剂盒包括检测卡和样品裂解液，所述检测卡的内部设有试纸条，其特征在于：所述试纸条包括样品垫、金标垫和异嗜性抗体阻断剂结合物垫，所述金标垫上设有抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体1和抗恶性疟原虫HRP-Ⅱ单克隆抗体1；所述检测卡的上板块上设有加样口和样品裂解液口，所述加样口的位置与金标垫的位置相对应，所述样品裂解液口与所述样品垫的位置相对应；

所述试纸条还包括吸水纸、硝酸纤维素膜和底板，其中底板的中间位置粘贴有硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜的一端搭接吸水纸，所述硝酸纤维素膜的另一端搭接异嗜性抗体阻断剂结合物垫，所述异嗜性抗体阻断剂结合物垫的另一端搭接金标垫，所述金标垫的一端搭接样品垫；

异嗜性抗体阻断剂结合物垫的制备为：取玻璃纤维放入不锈钢盘，取30～40mL且浓度为0.2～0.5mg/mL异嗜性抗体阻断剂溶液,倒入不锈钢盘，使液体完全均匀吸收、干燥，得阻断剂结合物垫。

2.根据权利要求1所述的一种用于检测恶性疟和间日疟的试剂盒，其特征在于：金标垫的制备包括胶体金的制备和胶体金标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体1和抗恶性疟原虫HRP-Ⅱ单克隆抗体1；其中制备得到的胶体金溶液pH 为8.2～8.5；胶体金标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体1和抗恶性疟原虫HRP-Ⅱ单克隆抗体1时将pLDH单克隆抗体1和HRP-Ⅱ单克隆抗体1同时加入金标液中搅拌，再加入牛血清白蛋白搅匀，最后加入6～10wt%NaCl溶液混匀、离心、弃沉淀后上清液继续离心，吸去上清液，将沉淀物用 PBS 缓冲液溶解得到复溶后胶体金标物；取玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后胶体金标物40～50mL，体积浓度为20%，倒入不锈钢盘，使金溶液完全均匀吸收、干燥即可。

3.根据权利要求1所述的一种用于检测恶性疟和间日疟的试剂盒，其特征在于：所述硝酸纤维素膜上设有检测线1、检测线2和质控线，其中所述检测线1上包被有抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体2，所述检测线2上包被有抗恶性疟原虫HRP-Ⅱ单克隆抗体2，所述质控线上包被有羊抗鼠IgG抗体；且包被时抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体2的浓度为1.5～2.0mg/mL；所述抗恶性疟原虫HRP-Ⅱ单克隆抗体2的浓度为0.5～1.0mg/mL，所述羊抗鼠IgG 抗体的浓度为1.0～2.0mg/mL。

4.根据权利要求1所述的一种用于检测恶性疟和间日疟的试剂盒，其特征在于：所述样品裂解液包括pH为7.0～8.0的缓冲液、表面活性剂和细胞裂解剂，所述缓冲液为Tris缓冲液、磷酸缓冲液、硼酸缓冲液中的一种；所述表面活性剂为吐温20、曲拉通100、S9、S21中的至少两种；所述细胞裂解剂为脱氧胆酸钠，每100mL裂解液中表面活性剂的添加量为0.05～0.5g，细胞裂解剂的添加量为0.03～0.05g。

5.根据权利要求1所述的一种用于检测恶性疟和间日疟的试剂盒，其特征在于：所述样品垫经过样品处理液涂布、干燥得到；其中所述样品处理液包括pH为8～11的缓冲液、大分子聚合物、表面活性剂和封闭剂，每100mL的所述样品处理液中所述大分子聚合物的添加量为0.05～1g，所述表面活性剂的添加量为0.05～0.5g，所述封闭剂的添加量为0.05～2g。

6.根据权利要求5所述的一种用于检测恶性疟和间日疟的试剂盒，其特征在于：所述缓冲液为Tris缓冲液、磷酸缓冲液、硼酸缓冲液中的一种；所述大分子聚合物为PVP、PEG20000中的至少一种；所述表面活性剂为吐温20、吐温80、曲拉通100、S9、S21中的至少两种；所述封闭剂为酪蛋白、酪蛋白钠、BSA中的一种。