[发明专利]R1R6基因型苹果作为受体材料在制备红肉转基因苹果中的应用

说明书

本发明公开了R1R6基因型苹果作为受体材料在制备红肉转基因苹果中的应用。本发明提供了R1R6基因型苹果作为受体材料在制备转基因苹果中的应用。本发明还提供了苹果(Malus sp.)BCF2作为受体材料在制备转基因苹果中的应用。本发明还提供了一种制备转基因苹果的方法，包括如下步骤：苹果(Malus sp.)BCF2作为受体材料进行遗传转化，得到转基因苹果。本发明的发明人发现，以“紫红一号”苹果和“嘎啦”苹果为亲本得到的F2代中，基因型为R1R6的株系更容易得到组培苗，且作为遗传转化受体具有更高的转化效率，其中G2株系的转化率最高。本发明对于转基因红肉苹果的创制具有重大的应用价值。

技术领域

本发明涉及R1R6基因型苹果作为受体材料在制备红肉转基因苹果中的应用。

背景技术

苹果是我国落叶果树的第一大树种，据2016年统计数据显示，我国苹果栽培面积和产量分别达到246.69万hm2和4388.23万t，居世界首位，是世界上最大的苹果资源、生产和消费国。苹果耐贮性好，供应周期长，其果实含有较高比例的、人体比较容易吸收的游离多酚，具有很好的抗氧化、抗肿瘤、预防心脑血管疾病及保肝等作用，营养保健价值高。

近几年，随着苹果全基因组测序的完成，国内外有关苹果的基础研究取得了长足的进步，越来越多的与苹果产量、抗性、品质、发育等相关的功能基因被克隆、鉴定。但是，受限于转基因苹果材料极难获得，很多基因的功能无法得到全面的验证。目前，国内外用于转基因功能验证的苹果材料仅有一个‘嘎啦’的组培苗‘GL3’，其转化效率较低。此外，‘嘎啦’的组培苗‘GL3’属于普通白肉苹果，果肉中的类黄酮、花青苷等营养保健成分极低，不适于开展相关研究。国内外仍未有可用于基因编辑的红肉苹果组培苗。

发明内容

本发明的目的是提供R1R6基因型苹果作为受体材料在制备红肉转基因苹果中的应用。

本发明提供了R1R6基因型苹果作为受体材料在制备转基因苹果中的应用。

本发明还提供了R1R6基因型苹果作为转基因受体材料在苹果育种中的应用。

本发明还提供了一种制备转基因苹果的方法，包括如下步骤：将R1R6基因型苹果作为受体材料进行遗传转化，得到转基因苹果。

所述R1R6基因型苹果为从F2代苹果中筛选得到的；

所述F2代苹果为F1代苹果的后代；

所述F1代苹果为“紫红一号”苹果和“嘎啦”苹果的杂交后代；

筛选R1R6基因型苹果的方法如下：以苹果的基因组DNA为模板，采用序列表的序列1所示的引物R6F和序列表的序列2所示的引物R6R组成的引物对进行PCR扩增，如果得到大小分别为483-503bp和382-402bp的两种扩增产物，待测苹果为R1R6基因型苹果。

所述F2代苹果为F1代苹果的直接后代，即第一代后代。

所述F2代苹果为F1代苹果自然授粉得到的后代。

所述F1代苹果为“紫红一号”苹果和“嘎啦”苹果的直接杂交后代，即第一代后代。

“紫红一号”苹果作为父本，“嘎啦”苹果作为母本。

所述苹果的基因组DNA具体可为苹果的叶片的基因组DNA。

所述转基因苹果为红肉转基因苹果。红肉转基因苹果为叶片总类黄酮含量为2000mg/kg以上的转基因苹果。

所述转基因苹果为高类黄酮含量的转基因苹果。高类黄酮含量的转基因苹果为叶片总类黄酮含量为2000mg/kg以上的转基因苹果。

所述苹果育种为红肉苹果育种。红肉苹果为叶片总类黄酮含量为2000mg/kg以上的苹果。