[发明专利]一种检测乙酰半胱氨酸中细菌内毒素的方法

说明书

本发明涉及一种检测乙酰半胱氨酸中细菌内毒素的方法，它包括以下步骤：将乙酰半胱氨酸用氢氧化钠溶液(浓度为0.5‑1.2mol/L)溶解混匀，使混合溶液中供试品乙酰半胱氨酸的浓度为0.08‑0.12g/ml；在不超过最大有效稀释倍数的情况下对乙酰半胱氨酸氢氧化钠溶液进行稀释，制成供试品溶液；再采用凝胶法进行细菌内毒素检查。采用本发明的检测方法可以消除乙酰半胱氨酸对细菌内毒素的干扰作用，检测结果准确可靠、操作简便，检测成本低，相对于热源法，操作方便、经济、重现性好。

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体涉及一种检测乙酰半胱氨酸中细菌内毒素的方法。

背景技术

细菌内毒素是革兰氏阴性菌的细胞壁成分，当细菌死亡或自溶后便会释放出内毒素。因此，细菌内毒素广泛存在于自然界中。当内毒素通过消化道进入人体时并不产生危害，但内毒素通过注射等方式进入血液时则会引起不同的疾病。内毒素小量入血后被肝脏细胞灭活，不造成机体损害，内毒素大量进入血液就会引起发热反应——“热原反应”，甚至导致死亡。因此，生物制品类、注射用药剂、化学药品类、放射性药物、抗生素类、疫苗类、透析液等制剂以及医疗器材类(如一次性注射器，植入性生物材料)必须经过细菌内毒素检测试验合格后才能使用。制剂中的细菌内毒素，最大来源为生产用原辅料，因此，生产制剂的原辅料的内毒素水平同样需要监控。乙酰半胱氨酸为白色或类白色结晶性粉末；有类似蒜的臭气；有引湿性。用于制剂生产的乙酰半胱氨酸，也需要进行细菌内毒素检测。

目前，细菌内毒素检测主要有两种方法，分别为：凝胶法和光度法。凝胶法操作简单，普及程度高，试验条件要求低(37±1℃，60±2分钟)。而光度法，操作相对复杂，普及程度低，试验需要酶标仪等专业的设备。凝胶法因上述优势，被各国药典选择作为仲裁试验的方法(当内毒素检测结果出现争议时，以凝胶法结果为准)。

目前，乙酰半胱氨酸因为结构式中有巯基(-SH)的存在，能破坏鲎试剂中的凝固酶原、凝固蛋白原，引发细菌内毒素反应的抑制作用，即便样品中含有细菌内毒素，也会因为样品对细菌内毒素检测的抑制作用，而使检测结果呈现“假阴性”。市面上采用的方法主要为：热源法检测。而热源法存在重现性、灵敏度差；实验动物的饲养，费用高，时间长；爱护动物方面；干扰因素多等缺点，不适宜大量采用。

发明内容

本发明的目的是在现有技术的基础上，提供一种凝胶法检测乙酰半胱氨酸中细菌内毒素的方法。

本发明的技术方案如下：

包括以下步骤：1.将乙酰半胱氨酸用0.5～1.5mol/L氢氧化钠溶解为0.08～0.12g/ml浓度工作母液，在不超过最大有效稀释倍数的情况下对乙酰半胱氨酸氢氧化钠溶液进行稀释，制成供试品溶液；再采用凝胶法进行细菌内毒素检查。本发明以细菌内毒素检查用水溶解或稀释乙酰半胱氨酸制备体积浓度为10％乙酰半胱氨酸。氢氧化钠溶液也采用细菌内毒素检查用水进行配置。在制备供试品溶液时，对乙酰半胱氨酸和氢氧化钠的混合溶液采用细菌内毒素检查用水进行稀释，在不超过最大有效稀释倍数的情况下，按照《2020药典细菌内毒素检查法》，进行细菌内毒素检查。

在一种优选方案中，在不超过最大有效稀释倍数的情况下，先以各稀释倍数的供试品溶液进行干扰实验，找出无干扰情况下的最小稀释倍数，再以该最小稀释倍数稀释制成的供试品溶液进行细菌内毒素检查。

在本发明中，根据待测乙酰半胱氨酸的细菌内毒素限值和鲎试剂的灵敏度确定最大有效稀释倍数，例如：乙酰半胱氨酸细菌内毒素限值为0.5Eu/mg；鲎试剂的灵敏度为0.25Eu/ml；可以确定其最大有效稀释倍数为200倍。