[发明专利]一种人KLF7基因启动子及其构建方法与应用

说明书

本发明公开了一种人KLF7基因启动子及其构建方法与应用，属于基因工程技术领域。所述人KLF7基因启动子核苷酸序列选自如SEQ ID NO：1‑SEQ ID NO：18所示任一条序列；以人体精液中提取DNA作为模板，利用引物进行PCR扩增和限制性酶切的方法获取了18种人KLF7启动子，通过试验验证，发现18种启动子在鸡前脂肪细胞中都具有启动子活性，这为揭示多种人KLF7转录剪接体表达的调控机制和开发靶向KLF7表达的药物具有重要意义，并且为研究人类多种与KLF7基因调控的疾病治疗奠定基础。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及一种人KLF7基因启动子及其构建方法与应用。

背景技术

Krüppel样因子(Kruppel-like factors，KLFs)是一类存在于动物体内的转录因子，它们参与细胞增殖、分化和凋亡等多个生命过程的调控。目前，人体内共发现了17种KLF因子，它们的蛋白质结构特征是羧基端(carboxyl terminus，C端)具有三个典型的C2H2锌指结构作为DNA结合结构域，氨基端(amino terminus，N端)序列作为转录调控结构域在家族成员间保守性差。1998年，Matsumoto等通过简并PCR技术从人血管内皮细胞中克隆得到一个之前从未报道过的KLF因子，根据其广泛表达于成人多种组织的特性，将其命名为普遍存在的Krüppel样因子(Ubiquitous KLF，UKLF)。根据系统命名法，UKLF又被命名为KLF7。

人KLF7(human KLF7，hKLF7)基因位于2号染色体2q33.3区域的反义链，数量遗传学报道显示人2q33.3与早发性关节炎(early-onset osteoarthritis，FOA)和早发性肥胖(肥胖反弹的年龄)相关。KLF7单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)研究表明，KLF7是人类肥胖和2型糖尿病发生的相关基因。日本人群体研究表明，hKLF7第二内含子的一个SNP(rs2302870，chr2:207953406A/C)与2型糖尿病(type2diabetes)的发生相关。丹麦人群体研究显示rs2302870位点与2型糖尿病和肥胖没有显著相关，但是位于hKLF75’UTR的另一个SNP(rs7568369，chr2:208031315C/A)与肥胖相关。

采用SNP基因芯片与DNA池相结合(SNP Microarrays and Pooling，SNP-MAP)的研究显示位于人KLF7和cAMP反应元件结合蛋白1(cAMP responsive element bindingprotein 1，CREB1)之间的一个SNP位点(rs991684)与人轻度智力障碍(Mild mentalimpairment，MMI)相关，该位点可能与KLF7和(或)CREB1处于连锁不平衡状态。一个瘢痕疙瘩家系5个个体(4例瘢痕疙瘩患者，1例健康人)的全基因组重测序结果显示，KLF7基因拷贝数变异(copy number variation,CNV)可能与瘢痕疙瘩的形成有关。

转录因子KLF7是一个核蛋白，具有核定位序列(Nuclear localizationsequence，NLS)，主要定位于细胞核中。NCBI Gene数据库检索显示，hKLF7至少能够转录5种不同转录本，编码4种不同的蛋白质和1种长链非编码RNA。