[发明专利]一种达巴万星前体A40926B0高产菌株及应用

权利要求书

1.一种达巴万星前体A40926B0高产菌株，其特征在于，所述菌株为哥伦扎诺野野村菌，分类命名为：哥伦扎诺野野村菌L71（Nonomuraea gerenzanensis L71），保藏号：CGMCCNo.21334，保藏日：2020年12月7日；所述的一种达巴万星前体A40926B0高产菌株通过以下步骤实现：

（1）设计特异性引物以哥伦扎诺野野村菌L70基因组BAC文库为模板，扩增SEQ IDNO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3，筛选包含完整A40926B0生物合成基因簇序列的单克隆菌落：

上部筛选引物SEQ ID NO.4：CGTTGAACTGGGTGGACATG，SEQ ID NO.5：TGGGACCTGCTGGAGGAG

内部筛选引物SEQ ID NO.6：GCAACATGGTTGTCAGTCTG，SEQ ID NO.7：CTCTCGGTAGAGATCCACTTC

下部筛选引物SEQ ID NO.8：GTAGTGGATGGCGAGCCAC，SEQ ID NO.9：GCTGGTACGGGACAAGGTC ；

（2）步骤（1）中筛选到的包含完整A40926B0生物合成基因簇表达载体pMSBBAC1-A40926-1的单克隆菌落通过双亲本接合转移转入大肠杆菌E.coil ET12567/pUB307中；

（3）通过双亲本接合转移将步骤（2）中的质粒转入出发菌株哥伦扎诺野野村菌L70中；

（4）通过发酵筛选获得高效生产A40926B0的基因工程菌株哥伦扎诺野野村菌L71，产量达320mg/L。

2.根据权利要求1所述的达巴万星前体A40926B0高产菌株，其特征在于，制备步骤（2）中通过筛选获得包含完整A40926B0生物合成基因簇的质粒后，质粒pMSBBAC1-A40926-1通过接合转移转入出发菌株哥伦扎诺野野村菌L70中。

3.根据权利要求1所述的达巴万星前体A40926B0高产菌株，其特征在于，SEQ ID NO.1由463个核苷酸组成，位于A40926B0生物合成基因簇第一个基因dbv1上游距离13787bp处；SEQ ID NO.2由353个核苷酸组成,位于A40926B0生物合成基因簇第21个基因dbv21下游距离119bp处；SEQ ID NO.3由496个核苷酸组成，位于A40926B0生物合成基因簇第37个基因dbv37下游距离19571bp处。

4.根据权利要求1所述的达巴万星前体A40926B0高产菌株，其特征在于，将所述的上部筛选引物、内部筛选引物、下部筛选引物均能扩增出对应目的片段SEQ ID NO.1、SEQ IDNO.2、SEQ ID NO.3的质粒利用大肠杆菌进行双亲接合获得所述的高产A40926B0的基因工程菌株哥伦扎诺野野村菌L71。

5.根据权利要求1所述的哥伦扎诺野野村菌L71（Nonomuraea gerenzanensis）在提高达巴万星前体A40926B0产量中的应用。