[发明专利]一种基于UPLC-ESI-MS检测杜鹃兰假鳞茎化学成分的方法

权利要求书

1.一种基于UPLC-ESI-MS检测杜鹃兰假鳞茎化学成分的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)杜鹃兰化学成分提取

杜鹃兰假鳞茎干燥，粉碎后过筛，然后乙醇超声提取三次，合并提取液；

(2)标准品制备

分别精密称取秋水仙碱、大黄素甲醚、大黄酸、大黄素、槲皮素、芦丁、齐墩果酸、肉豆蔻酸和腺苷9种标准品，加甲醇定容，用微孔滤膜过滤；

(3)待测样品制备

将杜鹃兰假鳞茎提取物加入色谱级甲醇超声，并定容，过微孔滤膜进样；

(4)色谱检测条件

取步骤(2)中9种标准品混和液和步骤(3)待测样品，分别采用液相色谱-质谱联用系统和HESI-Ⅱ离子源检测杜鹃兰假鳞茎提取物的化学成分；

(5)化学成分的定性解析

根据杜鹃兰假鳞茎的化学成分与9种标准品的保留时间和分子量进行比对，三年生杜鹃兰假鳞茎含有以下9种成分：秋水仙碱、槲皮素、腺苷、芦丁、大黄素、大黄酸、大黄素甲醚、肉豆蔻酸和齐墩果酸，其中，腺苷和秋水仙碱为阳离子模式下检测得到，其余7种成分为阴离子模式下检测得到。

2.根据权利要求1所述一种基于UPLC-ESI-MS测定杜鹃兰假鳞茎化学成分的方法，其特征在于，步骤(1)所述乙醇为70％和55％乙醇，超声提取3次，每次提取时间20min。

3.根据权利要求1所述一种基于UPLC-ESI-MS测定杜鹃兰假鳞茎化学成分的方法，其特征在于，步骤(2)和步骤(3)所述微孔滤膜直径为0.22μm。

4.根据权利要求1所述一种基于UPLC-ESI-MS测定杜鹃兰假鳞茎化学成分的方法，其特征在于，步骤(4)所述液相系统为Dionex Ultimate 3000RSLC(HPG)(Thermo FisherScientific)，色谱柱为ThermoFisher Hypersil GOLD aQ(100*2.1mm*9μm)；梯度洗脱溶剂为含0.1％的甲酸(有机相A)和含0.1％甲醇的水(水相B)的乙腈溶液，洗脱时间及有机相配比分别为：0-2min(20％A+80％B)；3-6min(40％A+60％B)；12-20min(90％A+10％B)；20.1-25min(20％A+80％B)，流速为0.2mL/min，柱温为40℃。

5.根据权利要求1所述一种基于UPLC-ESI-MS测定杜鹃兰假鳞茎化学成分的方法，其特征在于，步骤(4)所述质谱系统为Thermo Scientific Q Exactive Focus(Thermo FisherScientific)，全质谱扫描范围为100-1200m/z，分辨率为17500-70000，最大50-100ms，分离宽度为1.5m/z，AGC和阈值设置为1e⁶和2e⁵，动态减排为5s。

6.根据权利要求1所述一种基于UPLC-ESI-MS测定杜鹃兰假鳞茎化学成分的方法，其特征在于，步骤(4)所述HESI-II电离方式为电喷雾离子源ESI，分别以正负离子模式检测，其参数设定为：雾化电压3.0kV(+)/2.5kV(-)，毛细管温度为320℃，探针加热温度为350℃，保护气体为35arb，AUX气体为10arb，尾气为0arb。