[发明专利]一种牙鲆弹状病毒基因工程亚单位疫苗

说明书

本发明的目的是提供一种牙鲆弹状病毒基因工程亚单位疫苗，即采用生物技术对牙鲆弹状病毒G蛋白进行抗原表位分析、设计，获得一种牙鲆弹状病毒新型融合蛋白rG，并以该融合蛋白作为抗原来制备牙鲆弹状病毒基因工程亚单位疫苗。本发明中牙鲆弹状病毒新型融合蛋白rG，其编码蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:1；其中一种核苷酸序列为SEQ ID NO:2。本发明利用毕赤酵母系统构建了能表达牙鲆弹状病毒新型融合蛋白rG的基因工程菌。将重组表达的蛋白纯化后制备成基因工程亚单位疫苗，可使免疫后牙鲆获得免疫保护。

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体涉及一种牙鲆弹状病毒基因工程亚单位疫苗。

背景技术

牙鲆弹状病毒(Hirame rhabdovirus，HIRRV)为单股负链RNA病毒，是弹状病毒科粒外弹状病毒属新成员。HIRRV病毒粒子呈子弹状，长160～180nm，宽60～80nm。HIRRV基因组大小约11000bp，基因组含有6个开放阅读框(ORFs)，分别编码6种蛋白：核蛋白、磷蛋白、基质蛋白、糖蛋白、依赖RNA的RNA酶和非结构蛋白。其中，糖蛋白(G蛋白)是HIRRV的主要抗原，能够诱导机体产生中和抗体，同时也能够刺激细胞免疫，因此可以选择G基因作为抗原基因来构建基因工程亚单位疫苗。

HIRRV最早于1986年在日本兵库县的患病牙鲆和香鱼鱼苗中分离获得，主要感染海水鱼类。2012年以后发现HIRRV也能感染淡水鱼类。感染鱼具有鳍、肌肉组织及内部器官出血，造血器官坏死等症状。HIRRV给全球水产养殖业造成了严重的经济损失，目前尚无商业化的牙鲆弹状病毒疫苗进行防控。G蛋白是牙鲆弹状病毒的主要抗原，可以作为亚单位疫苗和DNA疫苗的候选蛋白。

发明内容

本发明的目的是提供一种牙鲆弹状病毒基因工程亚单位疫苗，即通过生物软件预测分析牙鲆弹状病毒G蛋白的主要抗原表位，通过引入通用T细胞表位，并去掉N端信号肽区域与C端影响蛋白表达的强疏水区域，获得一个新型融合蛋白rG，并以该蛋白作为抗原来制备牙鲆弹状病毒基因工程亚单位疫苗。

本发明首先提供一种牙鲆弹状病毒新型融合蛋白rG，其编码蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:1；

上述蛋白的一种核苷酸序列为SEQ ID NO:2；

本发明还提供一种牙鲆弹状病毒基因工程亚单位疫苗，其中的抗原为上述的牙鲆弹状病毒新型融合蛋白rG，其浓度为40～50μg/ml之间；

本发明的牙鲆弹状病毒基因工程亚单位疫苗，其制备步骤如下：

1)选用毕赤酵母偏好密码子，合成牙鲆弹状病毒新型融合蛋白rG基因序列，连入重组酵母表达载体中，构建成表达重组质粒；

2)将构建的表达重组质粒电转化宿主酵母菌，构建能表达牙鲆弹状病毒新型融合蛋白rG的重组基因工程酵母菌；用该基因工程菌高密度发酵表达出牙鲆弹状病毒新型融合蛋白rG；

3)对重组表达的牙鲆弹状病毒新型融合蛋白rG进行纯化后，加入白油佐剂制成疫苗。

本发明利用基因工程技术构建了能表达一种牙鲆弹状病毒新型融合蛋白rG的重组酵母菌株。将重组蛋白纯化后制备成基因工程亚单位疫苗，免疫牙鲆，可使其获得对牙鲆弹状病毒强毒的免疫保护。

具体实施方式

下面结合具体实施方式来进一步描述本发明，但本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的技术方案的情况下可以对本发明的技术方案的细节和形式进行修改或替换，这些修改和替换均落入本发明保护范围内。

实施例1牙鲆弹状病毒新型融合蛋白rG基因的获得