[发明专利]一种抗SMIM15单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种抗SMIM15单克隆抗体及其应用，属于免疫学技术领域。该抗体是由杂交瘤细胞株1M5分泌产生的。其制备方法为：制备小鼠免疫原和检测用抗原；制备抗SMIM15杂交瘤细胞株1M5；SMIM15阳性单克隆抗体的筛选；单克隆抗体的亚型鉴定；SMIM15阳性单克隆抗体特异性检测；BALB/c小鼠体内生产单抗并纯化；SDS‑PAGE检测抗体纯度；并采用WB、IHC和ELISA对SMIM15单克隆抗体进行功能鉴定及应用。本申请由杂交瘤细胞株1M5直接分泌产生的抗体是一种免疫球蛋白，无毒，可应用于免疫印迹和免疫组化，也可作为活性成分制成与SMIM15相关疾病的诊断及治疗的试剂或药物。

技术领域

本发明属于免疫学技术领域，涉及一种单克隆抗体，具体涉及一种抗SMIM15单克隆抗体及其应用。

背景技术

小整合膜蛋白15(Small Integral Membrane Protein 15，SMIM15，别名C5orf43)是一种蛋白质编码基因，在机体的结肠、甲状腺以及其他组织中普遍表达，已知SMIM15包括2个转录本，155个同源基因，SMIM15的主要功能是在各种生理病理情况下控制蛋白质的合成，进一步在细胞间的免疫识别以及物质运输等过程起到关键作用。

相比于正常组织，大多数癌组织中SMIM15的表达量较高，如胶质瘤、胃癌以及乳腺癌等，但是其相关机制以及研究未见有文献报道。近几年随着免疫治疗及免疫靶向治疗在多种疾病的综合治疗过程发挥重要作用，利用抗体将药物导向靶点细胞更是一种理想途径。当前对于蛋白质编码基因的研究逐步成为基础科研以及生物医学的重要靶标，使得用于医学科研和临床诊断的生物试剂市场需求量增加，就目前国内外文献的报道情况，尚未见具有人鼠交叉反应、高特异性抗SMIM15的单克隆抗体可用于免疫学方法的研究。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明所要解决的技术问题是提供一种抗SMIM15单克隆抗体，本发明所要解决的另一技术问题是提供上述抗SMIM15单克隆抗体的应用。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：

本申请所提供的分泌抗SMIM15单克隆抗体A1M5的杂交瘤细胞株1M5，已于2020年11月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2020247；所制备得到的抗SMIM15的单克隆抗体，命名为A1M5。

一种抗SMIM15的单克隆抗体A1M5，是由杂交瘤细胞株1M5分泌的。

采用杂交瘤细胞株1M5产生单克隆抗体A1M5的方法如下：

(1)为了增强免疫原性，从GenBank获取SMIM15基因的核苷酸片段序列(Accession：NM 001048249.4)，人工合成多肽片段：CAWAEYVVEWAAKDPY，并将多肽片段与KLH偶联作为免疫原，命名为2019-348多肽-KLH，以常规方法免疫SPF BALB/c雌性小鼠；

(2)从免疫合格小鼠无菌取其脾细胞作为抗原致敏的B细胞，按常规方法，将B细胞与骨髓瘤细胞SP2/0株融合，然后利用常规的融合细胞HAT筛选方法进行筛选，进而获取融合细胞生长克隆；

(3)应用酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA)方法筛选出抗SMIM15阳性而正常人血清阴性的单克隆抗体，最终选取9株稳定分泌抗SMIM15抗体的杂交瘤细胞，分别命名为1M4、1M5、1M6、1M7、1M8、1M9、1M10、1M11和1M15，它们分泌的单抗分别命名为A1M4、A1M5、A1M6、A1M7、A1M8、A1M9、A1M10、A1M11和A1M15；

(4)将筛选出来的9株阳性细胞株进行亚类鉴定，最后得到9株IgG的阳性杂交瘤细胞株，亚型分别为G1、G2a、G2b、G2b、G2a、G2a、G2a、G2b和G2a；