[发明专利]一种外周血miRNA结肠癌诊断标志物组合及其检测试剂盒

说明书

本发明涉及生物医药技术和分子生物学领域，具体涉及一种用于诊断结肠癌的外周血miRNA标志物组合、试剂盒及其应用。一种用于结肠癌诊断的外周血miRNA标志物组合，所述的miRNA标志物组合包括以下miRNA中的一种或者其中至少两种的组合：hsa‑miR‑1324、hsa‑miR‑20b‑5p、hsa‑miR‑216b‑5p、hsa‑miR‑367‑5p、hsa‑miR‑597‑5p和hsa‑miR‑934。所述的用于结肠癌诊断的外周血miRNA标志物组合在制备结肠癌检测试剂或工具中的应用。本发明提供的外周血miRNA肿瘤标志物检测属于液体活检范畴，与临床上常规的血液肿瘤标志物相比，具有特异性高、更早期发现、灵敏性度高和微创的特点，是包括肿瘤在内的多种疾病诊断的新型标志物。通过本发明建立的训练集对测试集的检测结果显示，其诊断效能高达95%，对未来临床的结肠癌诊断具有重要意义。

技术领域

本发明涉及生物医药技术和分子生物学领域，具体涉及一种用于诊断结肠癌的外周血miRNA标志物组合、试剂盒及其应用。

背景技术

结肠癌属于临床常见恶性肿瘤之一，目前在全世界的发病率和死亡率都高居恶性肿瘤第三位。2018年中国癌症统计报告显示：我国结肠癌发病率在全部恶性肿瘤中位居第3位，新发病例37.6万，死亡病例19.1万。其中，城市远高于农村，且结肠癌的发病率上升显著。权威医学期刊CA报告预估，2020年在中国，结肠癌的发病率和病死率均保持上升趋势。

由于结肠癌发病初期临床表现并不明显，这就使很多患者症状较明显时，已发展到癌症晚期，导致死亡率上升。对此，临床做好结肠癌的早期诊断、检测工作非常关键。在美国和欧洲国家，结肠镜是结肠癌筛查和监测的首选方式。然而近年来的研究中发现有两个问题普遍存在：一是不同研究所得到的结肠癌发病率(56％～77％)与病死率(29％～68％)下降的程度差异很大；二是结肠镜对近端结肠(盲肠至结肠肝曲)的保护作用不及远端结肠(结肠肝曲至直肠)。目前对于这两大问题最合理的解释是发生间歇期结肠癌，即在前一次结肠镜筛查之后与后一次筛查之前的监测间期中被诊断的结肠癌，也称为结肠镜检后结肠癌。有两类因素容易导致间歇期结肠癌的发生，分别是与内镜医师有关的技术因素和与病变生物学特性相关的因素。除此之外，粪便隐血试验、外周血CEA也用于结肠癌的诊断。但是粪便隐血试验特异性差，受饮食影响大，假阳性率30％；敏感度低，出血量90μg/ml才能检出。而外周血CEA不是恶性肿瘤的特异性标志，在诊断上只有辅助价值。因此需要寻找一种新的循环肿瘤标志物，实现动态实时监测，安全无害，费用低且简单可行，来弥补现有早期结肠癌的筛查和诊断技术的不足。

微小核糖核酸(microRNA，miRNA)是一类长度很短的非编码调控单链小分子RNA，长度约为21～22nt，由一段具有发夹环结构的长度为70～80个核苷酸的miRNA前体剪切后生成，能够通过与靶mRNA特异性的碱基配对引起靶mRNA的降解或者抑制其翻译，从而对基因进行转录后表达的调控。miRNA是基因表达调控机制体系中的热点分子，广泛参与调控细胞增殖、分化、凋亡等一系列生物学过程。近年来的研究表明，miRNA的表达和调控功能异常与肿瘤的发生发展密切相关。瘤源性miRNA来源于癌组织损伤后的被动释放和分泌体主动外排，它导致肿瘤人群外周血miRNA表达谱和健康人群相比具有显著差异。miRNA在血清中非常稳定，这与其能和蛋白等结合形成复合体有关。例如，循环中的游离miRNA可耐受煮、沸、高/低pH、RNase等处理，在反复冻融8次、室温放置24h等情况下，其含量仍保持相对稳定，说明血清miRNA具有作为理想的生物标志物所需的特性。另外，miRNA的转录具有严格的时序性和组织特异性。最后，miRNA表达还具有肿瘤发生的阶段特异性，同一种肿瘤在不同分期具有不同的miRNA表达谱，这对肿瘤的诊断有重要意义。

作为一种新的液体活检肿瘤早期标志物，miRNA具有性质稳定、检测方便快捷、结果准确性较高等特性，在临床应用中具有重要的潜在价值。当前发现的miRNA种类约有2800多种，本发明的研究旨在筛查到准确特异的结肠癌miRNA标志物。

发明内容