[发明专利]一种发酵毕赤酵母及其应用

说明书

一种发酵毕赤酵母及其应用，属于生物技术领域。本发明一方面提供了一种新的发酵毕赤酵母菌株，另一方面提供了该菌的应用，尤其是该菌在保持和提升植物花粉活力上的的作用。本发明的发酵毕赤酵母及其发酵液对果树花粉萌发活力有较好的促进作用，和对植物有一定的抗病害作用，可在农业生产上用于提高授粉效率、提升结实率、降低落花落果，从而增加产量，提高果树经济效益。本发明的发酵毕赤酵母及其发酵物源于自然归于自然，与环境友好兼容，无污染无残留，可作为新型无公害微生物药剂用于果树的无害化生产。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种发酵毕赤酵母及其应用。

背景技术

在果树的种植过程中，经常会由于各种各样的原因使得果树落花落果严重，这一现象不仅不利于果树健康生长，还降低了果实产量，严重影响果树种植的经济效益，尤其是名贵经济树种。以薄壳山核桃为例，栽培薄壳山核桃的经济效益十分明显，是胡桃科山核桃属中最有经济价值的树种。薄壳山核桃以风媒协助授粉，是典型的异交植物。现有生产实践认为，影响薄壳山核桃产量主要因素是高效授粉和座果率。我国引种薄壳山核桃已有100多年历史，现有薄壳山核桃产区面临的主要问题是产量不稳定，忽高忽低，总体产量低下。导致这一现象的原因有多个方面，如品种配置不当导致的授粉困难、花粉活力低下导致的授粉效果差继而结实率低、病虫害影响果实充盈率等，目前生产上主要是通过化学药剂和农药的使用来提高产量，这一方法虽然在控制病害中发挥了作用，但却影响了杂交授粉，也降低了果实品质，增加了食品安全隐患。生产中急需开发一种安全有效的生物调控方法，在控制果实病害的同时，改善授粉效率，提高产量。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种发酵毕赤酵母及其在果树授粉结实方面应用的技术方案；

所述的一种发酵毕赤酵母菌Pichia fermentans菌株15B1，其保藏号为CGMCCNo.19317；

所述的发酵毕赤酵母菌及其发酵液作为抑菌剂的应用；

所述的发酵毕赤酵母菌及其发酵液作为保持和提升花粉活力的应用；

本发明的发酵毕赤酵母菌源于自然归于自然、与环境友好兼容、无污染无残留，对植物开花授粉时保持和提高花粉萌发率有重要作用，从而在生产上促进授粉效率、提高结实率和降低落花落果。

附图说明

图1为发酵毕赤酵母菌15B1菌株在PDA培养基上的菌落形态学特征；

图1中，左侧为培养1天的菌落生长形态，右侧为培养4天的菌落生长形态。

具体实施方式

以下结合实施例来进一步说明本发明。下述的实施例并不对本发明作限定作用。

实施例1：发酵毕赤酵母15B1菌株的分离和鉴定

取新鲜野生葡萄，经70%酒精表面消毒，再用50%安替福民（次氯酸钠溶液）消毒半小时，最后无菌水浸泡冲洗4-5次。将上述处理后的材料在超净台上切开，取内表皮接种到PDA培养基（固体土豆培养基）平板上，待有菌长出时，分别划线纯化，并分别提取DNA进行分子鉴定，从而获得并确认该菌株。菌株确认的具体步骤如下：

1）样品收集：从平板中刮取少量待测菌入200μL的PCR管里，加入无菌水100μL，短时高速离心，去除上清液；

2）样品裂解：加入直径为0.1mm-0.5mm的玻璃珠至200μL PCR管总体积的50μL，再加入1mg/ml的proteinase K悬液100μL，56℃保温，同时500-1000rpm水平振荡培养1h；

3）核酸收集：加入5-10%的 chelex液50μL，80-95℃保温10-30min，短时高速冷冻离心，取上清液冷冻保存；