[发明专利]全基因组沉默子筛选系统及其应用

权利要求书

1.全基因组沉默子筛选系统，其中，所述系统包括MAS-seq载体，所述的MAS-seq载体包括强启动子hPGK、同源臂、标记基因GFP、poly A位点，所述MAS-seq载体的核苷酸序列如SEQID NO:1所示。

2.权利要求1所述的全基因组沉默子筛选系统在筛选基因组沉默子中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其中，所述应用如下：

打断待测基因序列、将打断的基因片段与Illumina接头连接，并使用含有MAS-seq载体同源臂序列的引物进行PCR扩增；

将纯化后的PCR产物同源重组至如权利要求1中所述的MAS-seq载体，构建成MAS-seq筛选质粒；

将MAS-seq筛选质粒转染细胞，抽提RNA，并富集标记基因mRNA；

将标记基因mRNA进行反转录，获得cDNA，并将cDNA进行PCR扩增；

将纯化后的PCR扩增产物进行高通量测序，并对测序结果进行分析，筛选出标记基因表达量低的测序结果，对应插入位点的序列即为筛选出的沉默子序列。

4.权利要求1所述的全基因组沉默子筛选系统在验证基因组沉默子中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其中，所述应用如下：

将待验证序列插入如权利要求1中所述的MAS-seq载体，构建验证质粒；

将验证质粒转染细胞；

收集细胞抽提RNA，并富集标记基因mRNA；

将富集的标记基因mRNA进行反转录荧光定量PCR检测；

将PCR检测结果与对照组进行比较，表达量显著低于对照组mRNA表达量，则待验证序列为沉默子；反之，为非沉默子。