[发明专利]骨髓间充质干细胞和髓核细胞共培养的方法及应用

说明书

本发明涉及细胞培养技术领域，更具体地，本发明涉及骨髓间充质干细胞和髓核细胞共培养的方法及应用。包括：将髓核细胞和骨髓间充质干细胞分别接种到培养板和培养板上方的插入物中，进行共培养。本发明通过提取腰椎间盘退行性变的人体骨髓，分离培养得到骨髓间充质干细胞后，与相同来源的退变的椎间盘髓核细胞共培养，刺激椎间盘再生，从根本上改善了椎间盘退变，促进髓核细胞的体外培养。通过将髓核细胞接种在培养上，骨髓间充质干细胞接种在插入物上，进行非接触式共培养，发现可明显抑制退变髓核组织得到的髓核细胞的退变，促进髓核组织的体外培养。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，更具体地，本发明涉及骨髓间充质干细胞和髓核细胞共培养的方法及应用。

背景技术

腰椎间盘退行性变与腰痛密切相关，腰椎间盘退行性变除了引起腰痛症状外，还可能引起下肢疼痛、麻木甚至活动障碍。一些研究已经确认髓核细胞凋亡以及椎间盘细胞外基质的丢失是椎间盘退变的结果。目前的治疗方案包括保守治疗和手术治疗，保守治疗通常不能长时间解除患者的痛苦，手术治疗除了对患者的创伤外还会让患者负担巨大的治疗费用，手术后的相关并发症也是不可忽视的问题，而且这两种治疗方式目的是缓解症状，而不是改变腰椎间盘退行性变的病理过程。

有研究发现髓核细胞数量的减少以及细胞外基质流失可能是椎间盘退变的原因，因此移植自体细胞可能对椎间盘退变有抑制作用。然而，既往研究表明，髓核细胞体外培养困难，培养条件要求较高，体外传代至第5代即可出现老化表现，通常很少能通过体外培养的方法获得从退变髓核组织中的髓核细胞。

发明内容

为了解决上述问题，本发明第一个方面提供了一种骨髓间充质干细胞和髓核细胞共培养的方法，包括：

将髓核细胞和骨髓间充质干细胞分别接种到培养板和培养板上方的插入物中，进行共培养。

作为本发明一种优选的技术方案，所述髓核细胞来自退变的髓核组织。

作为本发明一种优选的技术方案，所述髓核细胞的接种量为2×10³/cm²～4×10³/cm²。

作为本发明一种优选的技术方案，所述骨髓间充质干细胞的接种量为0.5×10³/cm²～1.5×10³/cm²。

作为本发明一种优选的技术方案，所述髓核细胞和骨髓间充质干细胞的接种量比为(2～4)：1。

作为本发明一种优选的技术方案，所述骨髓间充质干细胞为第二代骨髓间充质干细胞。

作为本发明一种优选的技术方案，所述髓核细胞为第三代髓核细胞。

作为本发明一种优选的技术方案，所述插入物的材料选自聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚碳酸酯、聚四氢呋喃中的一种。

作为本发明一种优选的技术方案，所述共培养的条件为37℃，5％CO₂。

本发明第二个方面提供了一种所述的骨髓间充质干细胞和髓核细胞共培养的方法在抑制髓核细胞退变的应用。

本发明与现有技术相比具有以下有益效果：

(1)本发明通过提取腰椎间盘退行性变的人体骨髓，分离培养得到骨髓间充质干细胞后，与相同来源的退变的椎间盘髓核细胞共培养，刺激椎间盘再生(包括增强细胞外基质的合成、髓核细胞的增殖、骨髓间充质干细胞分化为髓核细胞)，从根本上改善了椎间盘退变，促进髓核细胞的体外培养。

(2)通过将髓核细胞接种在培养上，骨髓间充质干细胞接种在插入物上，进行非接触式共培养，发现可明显抑制退变髓核组织得到的髓核细胞的退变，促进髓核组织的体外培养。