[发明专利]一种苏云金芽孢杆菌高密度发酵生产益生活性物质的方法

权利要求书

1.一种苏云金芽孢杆菌，分类命名：Bacillus thuringiensis IX-01，已于2020年09月11日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC M 2020486，保藏地址为中国，武汉，武汉大学。

2.一种发酵生产益生活性物质的方法，其特征在于，应用权利要求1所述苏云金芽孢杆菌高密度发酵，具体步骤如下：将种子液接种于发酵培养基，转化温度30-40℃，控制pH 5-7，设置初始通气比1-2vvm，初始转速250-400r/min为100％DO值；初始碳源添加量为20-30g/L，后续碳源的补加采用减速流加的策略；还对培养获得的发酵液进行分离纯化，所述分离纯化具体是：将苏云金芽孢杆菌的发酵液离心，收集上清液；用乙醇沉淀，收集沉淀并用去离子水溶解，得到粗糖液；将粗糖液经过层析分离，并经过冷冻干燥，获得纯化后的胞外多糖。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述种子液是在无菌条件下挑取单菌落接种于种子培养基，转化温度30-40℃，转速100-200r/min，培养10-20h获得的。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述碳源为葡萄糖。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述碳源减速流加策略为：发酵4h时以0.2-0.5mL/min流速流加葡萄糖，在0-12h时，转速为200-250r/min，通气量为0.5-0.75vvm；

当发酵进行至12h，调整转速逐步上升为250-300r/min，通气量逐步上升为0.75-1.2vvm，直至反应体系中的葡萄糖含量少于1g/L并维持0-10h，控制葡萄糖流加速率为0.1-0.2mL/min；

当发酵进行至50h时，再次调整转速逐步上升为350-450r/min，通气量逐步上升为1.25-1.5vvm，流加速率为0.1-0.5mL/min。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述种子培养基组分为：葡萄糖10-20g/L；胰蛋白胨5-10g/L；酵母粉1-10g/L；NaCl 1-10g/L；KH₂PO₄ 0.1-3g/L；K₂HPO₄ 0.1-1g/L；MgSO₄ 0.1-2g/L；pH 7.0～7.2。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基组分为：100-200g/L葡萄糖，10-20g/L大豆蛋白胨，10-20g/L酵母粉，0.1-5g/L K₂HPO₄，0.1-5g/L KH₂PO₄，0.1-5g/LBaSO₄，0.1-5g/L CaCl₂，0.1-5g/L MnCl₂，0.1-5g/L FeCl₃，pH 7.0-7.5。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述层析分离为粗糖液先过离子交换柱层析，再过葡聚糖凝胶柱层析。

9.权利要求1所述苏云金芽孢杆菌IX-01或权利要求2所述一种发酵生产益生活性物质的方法在溶栓药物生产中的应用。