[发明专利]奶粉中维生素K2的检测方法及检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种奶粉中维生素K₂的检测方法及检测试剂盒，包括以下步骤：样品前处理：取奶粉样品，加入酶和溶剂进行酶解后加入醇溶剂混合，再加入正己烷，离心，取上清液，浓缩，经稀释液稀释，作为待测样品溶液，注入二维切割色谱法进行测定；其中，所述酶为脂肪酶和蛋白酶中的至少一种。本发明的检测方法提取效率高，分析时间短，分离度好，检测限低，定量准确度高的检测方法。

技术领域

本发明涉及分析领域，特别是涉及一种奶粉中维生素K₂的检测方法及检测试剂盒。

背景技术

维生素K₂的检测方法主要参考《国家卫生和计划生育委员会公告(2016年第8号)》附录3(三)。该方法利用异丙醇直接对试样进行超声提取30min，过0.45μm滤膜后，定容并上高效液相色谱仪测试，利用反相色谱分离法测定试样中维生素K₂的含量。但是在实际应用中发现，利用该方法对复杂样品基质中维生素K₂进行测定时并不一定适合，因为奶粉中含有大量的脂肪和蛋白质，特别是目标物含量低且干扰因素多的奶粉试样，存在着提取效率低、定性困难、定量不准、干扰大、分析时间长等问题。

发明内容

基于此，本发明的目的是提供一种提取效率高，分析时间短，分离度好，检测限低，定量准确度高的检测方法。

具体技术方案如下：

一种奶粉中维生素K₂的检测方法，包括以下步骤：

样品前处理：取奶粉样品，加入酶和溶剂进行酶解后加入醇溶剂混合，再加入正己烷，离心，取上清液，浓缩，经稀释液稀释，作为待测样品溶液，注入二维切割色谱法进行测定；

其中，所述酶为脂肪酶和蛋白酶中的至少一种。

在其中一些实施例中，所述二维切割色谱法的一维流动相为乙腈和异丙醇；所述二维切割色谱法的二维流动相甲醇和叔丁基甲醚。

在其中一些实施例中，所述一维流动相中乙腈和异丙醇的体积比为 60～80:20～40；所述二维流动相中甲醇和叔丁基甲醚的体积比为75～95:5～25。

在其中一些实施例中，所述一维流动相中乙腈和异丙醇的体积比为 65～75:25～35；所述二维流动相中甲醇和叔丁基甲醚的体积比为80～90:10～20。

在其中一些实施例中，所述二维切割色谱法的一维色谱柱为Agilent Extend-C18柱，二维色谱柱为Inertsil ODS-SP柱。

在其中一些实施例中，所述酶为脂肪酶和蛋白酶。

在其中一些实施例中，所述蛋白酶为木瓜蛋白酶。

在其中一些实施例中，样品前处理中，所述醇溶剂为乙醇。

在其中一些实施例中，所述稀释液为异丙醇。

在其中一些实施例中，所述醇溶剂、溶剂、正己烷的体积比为(0.8～1.2)： (0.8～1.2)：(1～2)，进一步为(0.8～1.2)：(0.8～1.2)：1，或(0.8～1.2)： (0.8～1.2)：2。

在其中一些实施例中，所述二维切割色谱法的色谱条件还包括：

柱温：30±3℃；

检测波长：254±3nm；

进样量：10±1μL；

流速：一维色谱为(1.0±0.1)mL/min，二维色谱为(1.0±0.1)mL/min。