[发明专利]一种快速鉴定及定量样本中粟酒裂殖酵母的方法在审
申请号: | 202110035837.X | 申请日: | 2021-01-12 |
公开(公告)号: | CN112725496A | 公开(公告)日: | 2021-04-30 |
发明(设计)人: | 杜海;徐岩;周天慈;孙佳 | 申请(专利权)人: | 江南大学 |
主分类号: | C12Q1/6895 | 分类号: | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/6851;C12Q1/04;C12Q1/06;C12N15/11;C12R1/645 |
代理公司: | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人: | 林娟 |
地址: | 214000 江苏*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 快速 鉴定 定量 样本 中粟酒裂殖 酵母 方法 | ||
1.鉴定粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)的引物,其特征在于,其序列如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示。
2.应用权利要求1所述引物鉴定粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)的方法,其特征在于,包括步骤:将待测样品制成菌悬液,将菌悬液稀释涂布获得单菌落,以SEQ IDNO:2、SEQ ID NO:3所示序列为引物进行菌落PCR,通过凝胶电泳观察PCR产物,如果电泳图谱上PCR产物在100-250bp之间有条带,则说明样品中含有粟酒裂殖酵母,如果PCR产物不在100~250bp之间或者没有条带时,说明样品中没有粟酒裂殖酵母。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述样品为发酵食品成品或者取自发酵食品发酵过程中的样品,包括大曲或酒醅。
4.根据权利要求2或3所述的方法,其特征在于,所述样品中含有库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、拜尔结合酵母(Zygosaccharomyces bailii)、白色假丝酵母(Candida humilis)和巴氏哈萨克斯坦酵母(Kazachstania barnettii)。
5.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,还对100-250bp之间的PCR产物进行测序,并将测序结果与粟酒裂殖酵母的乙醇脱氢酶编码基因序列进行比对。
6.应用权利要求1所述引物定量检测粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)的方法,其特征在于,包括步骤:
(1)配置不同菌浓的、已知浓度的粟酒裂殖酵母菌悬液,分别提取菌悬液中的基因组;
(2)利用SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示引物对基因组分别进行荧光定量PCR,以CT值为横坐标,以细胞数量或细胞数量的Lg值为纵坐标,绘制标准曲线;
(3)提取待测样品中的基因组,利用SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示引物对待测样品的基因组进行荧光定量PCR,将荧光定量PCR的CT值代入标准曲线,换算得到样品中的粟酒裂殖酵母的数量。
7.区分粟酒裂殖酵母与库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、拜尔结合酵母(Zygosaccharomyces bailii)、白色假丝酵母(Candida humilis)、巴氏哈萨克斯坦酵母(Kazachstania barnettii)的方法,其特征在于,以SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示序列为引物,进行菌落PCR或分别以上述酵母的基因组为模板进行PCR,通过凝胶电泳观察PCR产物,如果电泳图谱上PCR产物在100-250bp之间有条带,则说明相应菌株是粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)。
8.用于粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)的定性、定量的检测试剂盒,其特征在于,含有SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示引物,还包括DNA聚合酶及缓冲液。
9.使用权利要求8所述试剂盒对粟酒裂殖酵母进行定性检测的方法,其特征在于,包括:将待测样品制成菌悬液,将菌悬液稀释涂布获得单菌落,以SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示序列为引物进行菌落PCR,通过凝胶电泳观察PCR产物,如果电泳图谱上PCR产物在100-250bp之间有条带,则说明样品中含有粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)。
10.使用权利要求8所述试剂盒对粟酒裂殖酵母进行定量检测的方法,其特征在于,包括:(1)配置不同菌浓的、已知浓度的粟酒裂殖酵母菌悬液,分别提取菌悬液中的基因组;(2)利用SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示引物对基因组分别进行荧光定量PCR,以CT值为横坐标,以细胞数量或细胞数量的Lg值为纵坐标,绘制标准曲线;(3)提取待测样品中的基因组,利用SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示引物对待测样品的基因组进行荧光定量PCR,将荧光定量PCR的CT值代入标准曲线,换算得到样品中的粟酒裂殖酵母的数量。
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