[发明专利]一种快速鉴定及定量样本中粟酒裂殖酵母的方法在审

专利信息
申请号: 202110035837.X 申请日: 2021-01-12
公开(公告)号: CN112725496A 公开(公告)日: 2021-04-30
发明(设计)人: 杜海;徐岩;周天慈;孙佳 申请(专利权)人: 江南大学
主分类号: C12Q1/6895 分类号: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/6851;C12Q1/04;C12Q1/06;C12N15/11;C12R1/645
代理公司: 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 代理人: 林娟
地址: 214000 江苏*** 国省代码: 江苏;32
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要:
搜索关键词: 一种 快速 鉴定 定量 样本 中粟酒裂殖 酵母 方法
【权利要求书】:

1.鉴定粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)的引物,其特征在于,其序列如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示。

2.应用权利要求1所述引物鉴定粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)的方法,其特征在于,包括步骤:将待测样品制成菌悬液,将菌悬液稀释涂布获得单菌落,以SEQ IDNO:2、SEQ ID NO:3所示序列为引物进行菌落PCR,通过凝胶电泳观察PCR产物,如果电泳图谱上PCR产物在100-250bp之间有条带,则说明样品中含有粟酒裂殖酵母,如果PCR产物不在100~250bp之间或者没有条带时,说明样品中没有粟酒裂殖酵母。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述样品为发酵食品成品或者取自发酵食品发酵过程中的样品,包括大曲或酒醅。

4.根据权利要求2或3所述的方法,其特征在于,所述样品中含有库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、拜尔结合酵母(Zygosaccharomyces bailii)、白色假丝酵母(Candida humilis)和巴氏哈萨克斯坦酵母(Kazachstania barnettii)。

5.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,还对100-250bp之间的PCR产物进行测序,并将测序结果与粟酒裂殖酵母的乙醇脱氢酶编码基因序列进行比对。

6.应用权利要求1所述引物定量检测粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)的方法,其特征在于,包括步骤:

(1)配置不同菌浓的、已知浓度的粟酒裂殖酵母菌悬液,分别提取菌悬液中的基因组;

(2)利用SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示引物对基因组分别进行荧光定量PCR,以CT值为横坐标,以细胞数量或细胞数量的Lg值为纵坐标,绘制标准曲线;

(3)提取待测样品中的基因组,利用SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示引物对待测样品的基因组进行荧光定量PCR,将荧光定量PCR的CT值代入标准曲线,换算得到样品中的粟酒裂殖酵母的数量。

7.区分粟酒裂殖酵母与库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、拜尔结合酵母(Zygosaccharomyces bailii)、白色假丝酵母(Candida humilis)、巴氏哈萨克斯坦酵母(Kazachstania barnettii)的方法,其特征在于,以SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示序列为引物,进行菌落PCR或分别以上述酵母的基因组为模板进行PCR,通过凝胶电泳观察PCR产物,如果电泳图谱上PCR产物在100-250bp之间有条带,则说明相应菌株是粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)。

8.用于粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)的定性、定量的检测试剂盒,其特征在于,含有SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示引物,还包括DNA聚合酶及缓冲液。

9.使用权利要求8所述试剂盒对粟酒裂殖酵母进行定性检测的方法,其特征在于,包括:将待测样品制成菌悬液,将菌悬液稀释涂布获得单菌落,以SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示序列为引物进行菌落PCR,通过凝胶电泳观察PCR产物,如果电泳图谱上PCR产物在100-250bp之间有条带,则说明样品中含有粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)。

10.使用权利要求8所述试剂盒对粟酒裂殖酵母进行定量检测的方法,其特征在于,包括:(1)配置不同菌浓的、已知浓度的粟酒裂殖酵母菌悬液,分别提取菌悬液中的基因组;(2)利用SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示引物对基因组分别进行荧光定量PCR,以CT值为横坐标,以细胞数量或细胞数量的Lg值为纵坐标,绘制标准曲线;(3)提取待测样品中的基因组,利用SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示引物对待测样品的基因组进行荧光定量PCR,将荧光定量PCR的CT值代入标准曲线,换算得到样品中的粟酒裂殖酵母的数量。

下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于江南大学,未经江南大学许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202110035837.X/1.html,转载请声明来源钻瓜专利网。

×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code