[发明专利]一种促进间充质干细胞球运动的方法

说明书

本发明涉及一种促进间充质干细胞球运动的方法，其解决了间充质干细胞以细胞球植入后运动规律不可控且不能满足成骨需要存在的技术问题，本发明使用内皮生长因子来促进间充质细胞球扩散。本发明可用于间充质干细胞球的植入领域。

技术领域

本发明涉及一种促进细胞运动的方法，具体地说，涉及一种促进间充质干细胞球运动的方法。

背景技术

目前，间充质干细胞的植入都是分散植入的方式，这种间充质干细胞植入方法让干细胞单独暴露在微环境中，其主要存在分散植入时干细胞早期存活率低、分散植入细胞量低于球体植入的细胞量、分散植入成骨效果差等问题。

如果将间充质干细胞以细胞球的方法植入，虽然可以解决上述干细胞分散植入存在的早期存活率低、植入量少、植入效果差等问题，但是间充质干细胞以细胞球植入后，其运动规律不可控，并且植入后细胞球展开需要时间，不能满足成骨需要。

发明内容

本发明就是为了解决间充质干细胞以细胞球植入后运动规律不可控且不能满足成骨需要存在的技术问题，提供一种促进间充质干细胞球运动的方法。

为此，本发明提供一种促进间充质干细胞球运动的方法，使用内皮生长因子来促进间充质细胞球扩散。

优选的，本发明包括如下步骤：(1)制备培养基；(2)制备间充质细胞球；(3)向所述培养基中加入内皮生长因子，促进间充质细胞球扩散。

优选的，所述步骤(1)中：琼脂糖溶液，熔化后，滴加至微组织球体三维培养皿微模(MicroTissue 3D Petri Dish micro-mold spheroids)，静置，琼脂糖凝固成培养基。

优选的，所述步骤(2)中，培养至第五代的hMSCs细胞消化后，在所述的培养基上接种培养，细胞团聚成细胞球。

优选的，所述步骤(3)中，所述培养基中加入50-150ng/ml内皮生长因子。

本发明具有以下有益效果：

本发明通过加入内皮生长因子从而上调RAC1的功能，可以达到调控细胞群体在软基质上扩展运动的作用。

附图说明

图1a和图1b是本发明中细胞球光学显微镜下形态，其中图1a为细胞球接种1h的形态；图1b为细胞球接种24h时的形态(标尺为100μm)；

图2a和图2b为本发明中细胞球三维铺展模拟示意图；

图3a为本发明中细胞球24h Dapi免疫荧光染色(标尺100μm)；图3b为本发明中细胞球24h RAC1免疫荧光染色(标尺25μm)；图3c为本发明中细胞球24h phallodin免疫荧光染色(标尺25μm)；

图4为本发明中Cell-IQ活细胞动态监测(标尺为100μm)；

图5a、图5b、图5c、图5d、图5e、图5f为本发明中软基底Cell-IQ活细胞动态监测图；其中，图5a为培养基中加入100ng/ml内皮生长因子培养24h；图5b为培养基中加入100ng/ml内皮生长因子培养48h；图5c为培养基中加入50ng/ml内皮生长因子培养24h；图5d为培养基中加入50ng/ml内皮生长因子培养48h；图5e为培养基中加入150ng/ml内皮生长因子培养24h；图5f为培养基中加入150ng/ml内皮生长因子培养48h。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步描述。

实施例1

2％琼脂糖溶液，高温高压熔化后，缓慢滴加500μl加入至微组织球体三维培养皿微模(MicroTissue 3D Petri Dish micro-mold spheroids)，静置至室温后，琼脂糖凝固成细胞培养模具。