[发明专利]一种具有抑制新生血管生长及抑制炎症反应活性的蛋白质及其制备方法

权利要求书

1.一种具有抑制新生血管生长及抑制炎症反应活性的蛋白质，其特征在于，所述蛋白质采用非还原性SDS-PAGE(非还原性聚丙烯酰胺凝胶电泳)测定的分子量为25000-35000道尔顿，所述蛋白质的分子由α链和β链组成，α链的蛋白序列如SEQ ID No.1所示，β链的蛋白序列如SEQ ID No.2所示；所述蛋白质具有抑制新生血管生长及抑制炎症反应活性。

2.根据权利要求1所述的蛋白质，其特征在于，采用还原性SDS-PAGE(还原性聚丙烯酰胺凝胶电泳)法测定的α链分子量为12000-22000道尔顿，β链的分子量为9000-19000道尔顿。

3.权利要求1-2中任一所述的蛋白质在制备抑制新生血管生成和抑制炎症反应的药物中的应用。

4.权利要求1-2中任一所述的蛋白质在制备药物组合物中的应用，所述药物组合物为抑制新生血管生成和抑制炎症反应的药物组合物。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述药物组合物还包括药学可接受的载体或药学可接受的赋形剂和/或稳定剂。

6.一种权利要求1-2中任一所述的蛋白质的制备方法，其特征在于，依次按以下步骤进行：

(1)将尖吻蝮蛇蛇毒用Tris-HCl缓冲液溶解，离心收集上清液；

(2)将步骤(1)得到上清液通过已充分平衡的阴离子交换层析柱进行吸附，吸附完成后用A液洗脱未被吸附的杂蛋白，A液洗脱完成后用B液进行梯度洗脱，用分部收集器收集B液洗脱产物，并同时使用紫外检测器在280nm处检测追踪各组分峰值；本步骤中所述A液为pH7.0-9.0的0.01-0.1mol/L Tris-HCl溶液，B液为pH6.0-9.0的0.01-0.05mol/L Tris-HCl和0.05-0.6mol/L NaCl的混合溶液；

(3)将步骤(2)中收集的目的蛋白洗脱产物用截留分子量3000-10000Da的膜包进行超滤浓缩，将浓缩后的产物用已充分平衡好的阳离子交换层析柱进行吸附，吸附完成后用C液洗脱未被吸附的杂蛋白，C液洗脱完成后用D液进行梯度洗脱，用分部收集器收集D液洗脱产物，并同时使用紫外检测器在280nm处检测追踪各组分峰值；本步骤中C液为pH6.0-9.0的0.01-0.1mol/L Tris-HCl溶液，D液为pH7.0-9.0的0.01-0.06mol/L Tris-HCl和0.05-0.6mol/L NaCl的混合溶液；

(4)将步骤(3)中收集目的蛋白洗脱产物用截留分子量3000-10000Da的膜包进行超滤浓缩，将浓缩后的产物用亲和层析柱吸附，吸附完成后用平衡缓冲液平衡，再用Gly缓冲液洗脱，收集Gly洗脱峰对应的洗脱产物，用NaOH将该洗脱产物的pH调节至6.0-9.0本步骤中平衡缓冲液为pH6.0-9.0的0.01-0.1mol/L Tris-HCl和0.05-0.5mol/L NaCl的混合溶液，Gly缓冲液为0.1-0.5mol/L Gly，PH2.0-4.0；

(5)将步骤(4)中收集的经pH调整的Gly洗脱峰的洗脱产物用截留分子量3000-10000Da的滤膜进行超滤浓缩，将浓缩后的产物用凝胶层析柱吸附，吸附完成后用E液洗脱，收集洗脱峰对应的洗脱产物即为纯化后的蛋白质产品；本步骤中E液为pH6.0-9.0的0.01-0.1mol/L Tris-HCl和0.05-0.5mol/L NaCl的混合溶液。

7.根据权利要求6所述的蛋白质的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所用的Tris-HCl缓冲液的pH为7.0-9.0，浓度为0.01-0.1mol/L。

8.根据权利要求6所述的蛋白质的制备方法，其特征在于，步骤(1)中溶解温度为4℃，溶解时间为6-12h。

9.根据权利要求6所述的蛋白质的制备方法，其特征在于，步骤(1)中离心工艺为4000r/min离心两次，每次10min。