[发明专利]一种低温外切菊粉酶突变体MutAP122EK5及应用有效
| 申请号： | 202110041021.8 | 申请日： | 2021-01-13 |
| 公开（公告）号： | CN112725304B | 公开（公告）日： | 2022-10-18 |
| 发明（设计）人： | 张蕊;周峻沛;黄遵锡;岑潇龙;许波;韩楠玉;唐湘华;李俊俊;吴倩;高艳秀 | 申请（专利权）人： | 云南师范大学 |
| 主分类号： | C12N9/24 | 分类号： | C12N9/24;C12N15/56;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 刘妮 |
| 地址： | 650500 云*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 低温 外切 菊粉 突变体 mutap122ek5 应用 | ||
1.一种低温外切菊粉酶突变体MutAP122EK5，其特征在于，所述的突变体MutAP122EK5的氨基酸序列如SEQ ID NO. 1所示。
2.权利要求1所述的突变体MutAP122EK5的编码基因mutAP122EK5，其特征在于，所述的编码基因mutAP122EK5的核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所示。
3.包含权利要求2所述的编码基因mutAP122EK5的重组载体。
4.包含权利要求2所述的编码基因mutAP122EK5的重组菌。
5.权利要求1所述的低温外切菊粉酶突变体MutAP122EK5的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）将如SEQ ID NO.4所示野生外切菊粉酶基因inuAMN8和表达载体pEasy-E1相连接，获得包含inuAMN8的重组表达质粒pEasy-E1-inuAMN8；
2）以质粒pEasy-E1-inuAMN8为模板，设计突变引物5' CGAAGAAGACCGAAAGGGCCGGCAGGCGCAGTCG 3'和5' CCTTTCGGTCTTCTTCGTCACTGTAGGCACTGGTGTAAATG 3'，通过PCR扩增得到包含mutAP122EK5的重组表达质粒pEasy-E1-mutAP122EK5；
3）将重组表达质粒pEasy-E1-mutAP122EK5转化大肠杆菌BL21(DE3)，获得包含mutAP122EK5的重组菌株；
4）培养重组菌株，诱导重组外切菊粉酶突变体MutAP122EK5表达；
5）回收并纯化所表达的重组外切菊粉酶突变体MutAP122EK5；
6）活性测定。
6.权利要求1所述的突变体MutAP122EK5在酿酒中的应用。
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