[发明专利]热盐性敏感的菊粉酶突变体MutY119D及其制备方法

权利要求书

1.一种热盐性敏感的菊粉酶突变体MutY119D，其特征在于，所述的突变体MutY119D的氨基酸序列如SEQ ID NO. 1所示。

2.权利要求1所述的突变体MutY119D的编码基因mutY119D，其特征在于，所述的编码基因mutY119D的核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所示。

3.包含权利要求2所述的编码基因mutY119D的重组载体。

4.包含权利要求2所述的编码基因mutY119D的重组菌。

5.权利要求1所述的菊粉酶突变体MutY119D的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将如SEQ ID NO.4所示的野生外切菊粉酶基因inuAMN8和表达载体pEasy-E1相连接，获得包含inuAMN8的重组表达质粒pEasy-E1-inuAMN8；

2）以质粒pEasy-E1-inuAMN8为模板，设计突变引物5' TTACACCAGTGCCGACAGTGACGCCGCGCCGCTT 3'和5' TGTCGGCACTGGTGTAAATGGCCACCAGCGGG 3'，通过PCR扩增得到包含mutY119D的重组表达质粒pEasy-E1-mutY119D；

3）将重组表达质粒pEasy-E1-mutY119D转化大肠杆菌，获得包含mutY119D的重组菌株；

4）培养重组菌株，诱导重组菊粉酶突变体MutY119D表达；

5）回收并纯化所表达的重组菊粉酶突变体MutY119D；

6）活性测定。

6.权利要求1所述的突变体MutY119D在酿酒中的应用。