[发明专利]低温改良的外切菊粉酶突变体MutS117G有效
| 申请号： | 202110041587.0 | 申请日： | 2021-01-13 |
| 公开（公告）号： | CN112980813B | 公开（公告）日： | 2022-08-30 |
| 发明（设计）人： | 周峻沛;张蕊;黄遵锡;岑潇龙;唐湘华;许波;李俊俊;韩楠玉;吴倩;高艳秀 | 申请（专利权）人： | 云南师范大学 |
| 主分类号： | C12N9/24 | 分类号： | C12N9/24;C12N15/56;C12N15/10;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 刘妮 |
| 地址： | 650500 云*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 低温 改良 外切 菊粉 突变体 muts117g | ||
1.低温改良的外切菊粉酶突变体MutS117G，其特征在于，该突变体MutS117G的氨基酸序列如SEQ ID NO. 1所示。
2.如权利要求1所述的突变体MutS117G的编码基因mutS117G。
3.根据权利要求2所述的编码基因mutS117G，其特征在于，该编码基因mutS117G的核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所示。
4.包含如权利要求2或3所述的编码基因mutS117G的重组载体。
5.包含如权利要求2或3所述的编码基因mutS117G的重组菌。
6.如权利要求1所述的突变体MutS117G的制备方法，其特征在于，该方法包含：
将核苷酸序列如SEQ ID NO. 4所示的野生外切菊粉酶基因inuAMN8和表达载体pEasy-E1相连接，获得包含inuAMN8的重组表达质粒pEasy-E1-inuAMN8；
以质粒pEasy-E1-inuAMN8为模板，以如SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 8所示核苷酸序列的突变引物，通过PCR扩增得到包含mutS117G的重组表达质粒pEasy-E1-mutS117G；
将重组表达质粒pEasy-E1-mutS117G转化大肠杆菌BL21(DE3)，获得包含mutS117G的重组菌株；
培养重组菌株，诱导重组外切菊粉酶突变体MutS117G表达，以获得重组外切菊粉酶突变体MutS117G。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述包含mutS117G的重组菌株的制备为，将所述重组表达质粒pEasy-E1-mutS117G经DpnI酶消化，利用Mut Express® II FastMutagenesis Kit试剂盒将消化产物进行连接，再通过热激方式转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。
8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述诱导采用IPTG进行诱导。
9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述重组外切菊粉酶突变体MutS117G表达的产物经Nickel-NTA Agarose亲和，再经0–500mM且不为0mM的咪唑洗脱纯化，获得重组外切菊粉酶突变体MutS117G。
10.如权利要求1所述的突变体MutS117G在食品行业的应用。
11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述食品行业为酿酒行业。
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